本文關(guān)鍵詞：毛干中線粒體DNA 4977bp缺失突變與老年性聾功能損害程度的關(guān)系

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【摘要】：目的： 通過檢測(cè)人毛干線粒體DNA的狀態(tài)及缺失突變情況,探討毛干線粒體DNA4977bp缺失突變與老年性耳聾的關(guān)系,進(jìn)一步闡明毛干線粒體DNA的獲得性損傷在老年性耳聾發(fā)病中的意義。 方法： 1、病例選擇：收集山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科門診2013年6月至2013年11月就診的老年性耳聾患者,通過問卷調(diào)查和嚴(yán)格的聽力篩查項(xiàng)目(純音聽閾和鼓室圖)來收集樣本。納入研究標(biāo)準(zhǔn)：受試者必須是雙側(cè)、感音神經(jīng)性聽力損失；受試者雙側(cè)聽力在同一頻率差異在10分貝以內(nèi)；每個(gè)受試者純音聽閾閾值增加26分貝以上；每位受試者鼓室圖顯示沒有明顯其它能引起聽閾增高的病變。調(diào)查問卷詳細(xì)地包括了受試者以往的藥物史、家族史、既往及現(xiàn)病史,排除有明確的其它引起聽力損失疾病的就診者。 2、毛干總線粒體DNA的提取：每位納入研究的受試者收集4-6根毛干,使用chelex-100法提取毛干中線粒體DNA。 3、普通PCR：使用普通PCR方法進(jìn)一步驗(yàn)證毛干中線粒體DNA提取成功。 4、巢式PCR：采用巢式PCR檢測(cè)患者毛干中線粒體DNA狀態(tài)及線粒體DNA4977bp缺失比率。 5、DNA測(cè)序：使用ABI3730型自動(dòng)測(cè)序儀對(duì)巢式PCR擴(kuò)增的DNA缺失片段進(jìn)行測(cè)序,進(jìn)一步驗(yàn)證缺失片段為線粒體DNA4977bp。 6、實(shí)時(shí)定量熒光PCR：檢測(cè)受試者毛干中線粒體DNA4977bp缺失程度,觀察線粒體DNA4977bp缺失突變率與老年人群聽力功能受損程度的關(guān)系。 結(jié)果： 1、經(jīng)過嚴(yán)格聽力檢測(cè)及問卷調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)篩選的87例單純性老年性耳聾患者(60-83歲)和95例聽力正常老年人(63-81歲)為對(duì)象,每位受試者收集4-6根毛干。 2、普通PCR結(jié)果顯示：所有標(biāo)本均可擴(kuò)增出135bp線粒體DNA保守片段,表示每位受試者毛干提取DNA均為線粒體DNA。 3、巢式PCR結(jié)果顯示：線粒體DNA4977bp缺失突變陽(yáng)性標(biāo)本首次PCR可以擴(kuò)增出618bp的目標(biāo)片段,而未發(fā)生缺失突變的DNA樣本由于Taq酶功能的限制和延伸時(shí)間不足的限制不能擴(kuò)增出長(zhǎng)約5kb的片段；經(jīng)首次PCR證實(shí)缺失突變陽(yáng)性的標(biāo)本,再次PCR,可擴(kuò)增出396bp的目標(biāo)片段。老年性聾組線粒體DNA4977bp缺失突變發(fā)生率為59/87。其中,聽力損失在26-55dB之間,表現(xiàn)為輕中度聽力損失患者,缺失突變發(fā)生率為22/43；聽力損失在56-90dB之間以全頻損失,表現(xiàn)為中重度、重度聽力損失患者,缺失突變發(fā)生率為25/31；聽力損失90dB,表現(xiàn)為極重度聽力損失的患者,缺失突變發(fā)生率為12/13。而聽力損失26dB,表現(xiàn)為聽力正常組線粒體DNA4977bp缺失突變發(fā)生率8/95。Pearson相關(guān)系數(shù)分析結(jié)果顯示,線粒體DNA4977bp缺失突變與聽力損失嚴(yán)重程度之間存在著明顯相關(guān)性(r=0.858；P0.050)；卡方分析結(jié)果顯示不同組之間線粒體DNA4977bp缺失突變陽(yáng)性率有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=47.145；P=0.000)。 4、經(jīng)ABI3730型自動(dòng)測(cè)序儀對(duì)巢式PCR擴(kuò)增的DNA缺失片段進(jìn)行測(cè)序,結(jié)果顯示缺失片段為線粒體DNA4977bp。 5、實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明：輕中度聽力損失組,中重度、重度聽力損失組,極重度聽力損失組及正常聽力組線粒體DNA缺失量分別為11.97±4.12%、19.75±5.29%、33.68+10.30%、4.91±4.16%。四組之間的差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.050),而且老年性耳聾患者存在線粒體DNA4977bp缺失,且聽力損失越嚴(yán)重,缺失量越明顯(P0.050)。在8kHz(r=0.778,P0.050)和各頻率平均聽力損失(r=0.858,P0.050)患者均表現(xiàn)出該現(xiàn)象。結(jié)論： 1、老年性耳聾患者及正常聽力老年人群毛干中均存在線粒體DNA4977bp缺失突變； 2、老年性耳聾患者毛干線粒體DNA4977bp缺失突變率明顯高于正常聽力老年人群； 3、老年人群聽力功能受損程度與患者毛干線粒體DNA缺失突變量呈正相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：老年性聾 毛干 常見缺失 巢式PCR 測(cè)序 實(shí)時(shí)定量PCR
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R764.436
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• ~.略詞表12-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-19
• 實(shí)驗(yàn)步驟19-23
• 結(jié)果23-25
• 討論25-30
• 附圖30-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述38-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49-50
• 發(fā)表論文50-51
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 胡岢;老年性耳聾的研究進(jìn)展[J];中國(guó)聽力語(yǔ)言康復(fù)科學(xué)雜志;2005年02期

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3 韓維舉,韓東一,姜泗長(zhǎng),楊偉炎,戴樸,曹菊陽(yáng),郭維,胡吟燕;人聽覺器官線粒體DNA~(4977)缺失與老年聾的關(guān)系[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2000年06期

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5 韓維舉,韓東一,楊偉炎,姜泗長(zhǎng);噪聲暴露引起大鼠聽覺器官線粒體DNA缺失[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2003年05期

6 張欣欣,韓東一,丁大連,戴樸,楊偉炎,姜泗長(zhǎng),Richard J.Salvi;Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蝸易于出現(xiàn)mtDNA缺失突變—ROS對(duì)組織損傷的特異性研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年02期

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本文編號(hào)：990408