本文關(guān)鍵詞：敲低SAA基因表達(dá)對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 血清淀粉樣蛋白A 鼻咽腫瘤 表達(dá)載體 干擾載體

【摘要】：目的： 利用shRNA技術(shù)沉默血清淀粉樣蛋白A（SAA）表達(dá)，檢測(cè)該基因表達(dá)降低對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的影響，為揭示SAA基因表達(dá)功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 采用shRNA技術(shù)，構(gòu)建3組針對(duì)SAA基因的shRNA真核表達(dá)干擾載體，并進(jìn)行測(cè)序及blast對(duì)比鑒定；將shRNA真核表達(dá)干擾載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人鼻咽癌CNE2細(xì)胞，通過(guò)PT-PCR及Western-blotting技術(shù)，篩選出有效的小干擾RNA(siRNA)序列；利用shRNA技術(shù)和高表達(dá)載體分別沉默及過(guò)表達(dá)SAA基因，分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CNE2細(xì)胞后，檢測(cè)及驗(yàn)證該基因在CNE2細(xì)胞中的表達(dá)水平；運(yùn)用MTT及Hoechst33258熒光染色技術(shù)，，觀察及分析SAA基因的表達(dá)對(duì)CNE2細(xì)胞的生長(zhǎng)及凋亡的影響。 結(jié)果： 成功構(gòu)建針對(duì)SAA基因的shRNA真核表達(dá)干擾載體組，經(jīng)測(cè)序鑒定、blast對(duì)比、 PT-PCR及Western-blotting檢測(cè)，確定pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482為針對(duì)SAA基因設(shè)計(jì)的最有效的干擾RNA。將pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482和pCD3.1（+）-SAA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人鼻咽癌CNE2細(xì)胞，PT-PCR及Western-blotting結(jié)果顯示：pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干擾載體可有效沉默CNE2細(xì)胞中的SAA蛋白,pCDNA3.1（+）-SAA真核過(guò)表達(dá)載體可有效地過(guò)表達(dá)SAA蛋白，且其結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MTT及Hoechst33258熒光染色技術(shù)結(jié)果顯示：SAA基因表達(dá)降低可促進(jìn)CNE2細(xì)胞凋亡,增高可促進(jìn)CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)。 結(jié)論： 1、 pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干擾載體可有效沉默CNE2細(xì)胞中的SAA蛋白； 2、 SAA基因沉默可促進(jìn)CNE2細(xì)胞凋亡，SAA基因高表達(dá)可促進(jìn)CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：血清淀粉樣蛋白A 鼻咽腫瘤 表達(dá)載體 干擾載體
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 技術(shù)路線(xiàn)12-13
• 材料與方法13-29
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-43
• 討論43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 主要縮略詞及英文索引52-53
• 綜述53-60
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 在讀期間發(fā)表的論文60-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 馬春紅;李秀麗;董文琦;李運(yùn)朝;崔四平;賈銀鎖;王立安;;玉米小斑病菌C小種毒素誘導(dǎo)玉米離體根冠細(xì)胞凋亡的檢測(cè)[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

2 戴嵩瑋;王小敏;劉麗云;劉吉福;武珊珊;黃凌云;肖雪媛;何大澄;;一個(gè)在肺癌血清中高表達(dá)的標(biāo)志分子SAA的發(fā)現(xiàn)及鑒定[J];中國(guó)科學(xué)(C輯:生命科學(xué));2007年02期

3 徐建華;張秀明;黃憲章;莊俊華;;RNA干擾技術(shù)及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2008年05期

4 何菲;鄒凡文;;RNA干擾技術(shù)的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年07期

5 商闖;賈銀鎖;侯立白;馬春紅;;玉米離體根冠細(xì)胞凋亡的熒光顯微觀察(簡(jiǎn)報(bào))[J];分子細(xì)胞生物學(xué)報(bào);2008年04期

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本文編號(hào)：987535