本文關(guān)鍵詞：減毒沙門氏菌介導(dǎo)的Apoptin對(duì)喉癌的抑制效應(yīng)研究

  更多相關(guān)文章： 減毒沙門氏菌 凋亡素 喉癌 細(xì)胞凋亡 腫瘤特異性

【摘要】：本研究基于我們先前對(duì)凋亡素（Apoptin）基因的研究，，利用減毒沙門氏菌載體系統(tǒng)，構(gòu)建了具有腫瘤特異殺傷能力和腫瘤特異增殖能力的重組減毒沙門氏菌。 目的: 探討重組減毒沙門氏菌對(duì)喉癌細(xì)胞Hep-2的體外抑制作用，研究其對(duì)裸鼠荷人喉癌動(dòng)物模型實(shí)體腫瘤的體內(nèi)抑制效應(yīng)。為研發(fā)安全、靶向、高效和無(wú)耐藥的新型抗喉癌基因治療候選藥物奠定物質(zhì)和理論基礎(chǔ)，并為喉癌基因治療的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究積累經(jīng)驗(yàn)。 方法: 通過電轉(zhuǎn)移和抗生素加壓篩選等步驟獲得含有Apoptin基因的重組減毒沙門氏菌（rC-Apoptin）。以rC-Apoptin感染體外培養(yǎng)的人喉癌細(xì)胞Hep-2，通過western blot、RT-PCR等方法對(duì)外源基因Apoptin的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證；通過MTT檢測(cè)其對(duì)體外培養(yǎng)的Hep-2細(xì)胞的抑制作用；利用AO/EB染色在體外細(xì)胞培養(yǎng)水平驗(yàn)證rC-Apoptin誘導(dǎo)Hep-2細(xì)胞凋亡的功能。建立裸鼠荷人喉癌動(dòng)物模型，尾靜脈注射重組減毒沙門氏菌，通過檢測(cè)抑瘤率、生存期、腫瘤生長(zhǎng)趨勢(shì)等方法研究重組減毒沙門氏菌對(duì)體內(nèi)人喉癌實(shí)體腫瘤的抑制作用；分離裸鼠荷人喉癌模型動(dòng)物腫瘤組織，通過組織切片，利用光學(xué)顯微鏡觀察rC-Apoptin對(duì)實(shí)體腫瘤的抑制作用；通過細(xì)菌分布分析和對(duì)多臟器組織切片觀察，了解沙門氏菌在機(jī)體的分布以及對(duì)其他臟器的影響。 結(jié)果: 表達(dá)Apoptin基因的重組減毒沙門氏菌所攜帶外源基因可在Hep-2細(xì)胞內(nèi)有效表達(dá)。rC-Apoptin對(duì)體外培養(yǎng)的Hep-2細(xì)胞具有殺傷作用，并且其殺傷作用存在一定的量效和時(shí)效關(guān)系。rC-Apoptin能夠有效抑制體內(nèi)實(shí)體喉癌的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)動(dòng)物生存期，重復(fù)注射rC-Apoptin可明顯延長(zhǎng)腫瘤倍增時(shí)間（TDT，tumordoubling time）延長(zhǎng)腫瘤遲滯時(shí)間(TGD，tumor growth delay)。重組減毒沙門氏菌在腫瘤組織的富集量是肝臟富集量的1000倍。且該重組減毒沙門氏菌未對(duì)模型動(dòng)物肝、肺和腎等器官造成不良影響。 結(jié)論： 成功構(gòu)建了表達(dá)Apoptin的重組減毒沙門氏菌rC-Apoptin。rC-Apoptin感染Hep-2后能有效表達(dá)外源基因Apoptin。rC-Apoptin能夠有效抑制在體外培養(yǎng)的人喉癌細(xì)胞Hep-2的生長(zhǎng)，并且這種抑制作用在高劑量條件下呈現(xiàn)時(shí)間效應(yīng)依賴關(guān)系；在較長(zhǎng)感染周期條件下呈現(xiàn)劑量效應(yīng)依賴關(guān)系。rC-Apoptin不僅具有抑制模型動(dòng)物Hep-2實(shí)體喉癌生長(zhǎng)的功能，還可以有效提高模型動(dòng)物生存率。
【關(guān)鍵詞】：減毒沙門氏菌 凋亡素 喉癌 細(xì)胞凋亡 腫瘤特異性
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 英文縮略詞表12-14
• 第1章 引言14-16
• 第2章 文獻(xiàn)綜述16-23
• 2.1 CAV 與 Apoptin16-17
• 2.1.1 CAV 及 Apoptin 的來源16-17
• 2.1.2 Apoptin 的結(jié)構(gòu)與生物學(xué)特性17
• 2.2 Apoptin 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡17-19
• 2.2.1 Apoptin 誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞類型17-18
• 2.2.2 Apoptin 的穿梭功能和細(xì)胞核定位功能18
• 2.2.3 Apoptin 的腫瘤特異性磷酸化18-19
• 2.2.4 Apoptin 與神經(jīng)酰胺19
• 2.3 Apoptin 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制19-20
• 2.3.1 Apoptin 與 p5319-20
• 2.3.2 Apoptin 與 Bcl-220
• 2.4 Apoptin 與腫瘤治療20-22
• 2.5 結(jié)語(yǔ)22-23
• 第3章 材料和方法23-30
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 3.1.1 質(zhì)粒、細(xì)菌、細(xì)胞及小鼠23
• 3.1.2 主要試劑23
• 3.1.3 儀器設(shè)備23-24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法24-30
• 3.2.1 表達(dá) Apoptin 的重組減毒沙門氏菌的構(gòu)建及在 Hep-2 細(xì)胞中的表達(dá)24-27
• 3.2.2 重組減毒沙門氏菌對(duì)體外培養(yǎng)的 Hep-2 細(xì)胞的抑制作用1427-28
• 3.2.3 重組減毒沙門氏菌的體內(nèi)抑制喉癌作用28-30
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-42
• 4.1 表達(dá) Apoptin 的重組減毒沙門氏菌的構(gòu)建及在 Hep-2 細(xì)胞中的表達(dá)30-33
• 4.1.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定30-31
• 4.1.2 間接免疫熒光檢測(cè)31
• 4.1.3 RT-PCR31-32
• 4.1.4 Western blot32-33
• 4.2 重組減毒沙門氏菌對(duì)體外培養(yǎng)的 Hep-2 細(xì)胞的抑制效應(yīng)33-37
• 4.2.1 感染劑量對(duì)重組減毒沙門氏菌作用的影響33-35
• 4.2.2 感染時(shí)間對(duì)重組減毒沙門氏菌作用的影響35-36
• 4.2.3 AO/EB 染色分析36-37
• 4.3 重組減毒沙門氏菌的體內(nèi)抑制喉癌作用37-42
• 4.3.1 治療后各組小鼠臨床癥狀和腫瘤生長(zhǎng)趨勢(shì)37-38
• 4.3.2 模型動(dòng)物生存期38-39
• 4.3.3 腫瘤倍增時(shí)間(TDT)和腫瘤生長(zhǎng)延遲時(shí)間 (TGD)39-40
• 4.3.4 細(xì)菌分布40-41
• 4.3.5 組織切片觀察41-42
• 第5章 討論42-46
• 第6章 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果53-54
• 致謝54

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：981914