本文關(guān)鍵詞：左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體神經(jīng)細(xì)胞的影響

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【摘要】：目的：弱視是眼科臨床常見的兒童眼病,是嬰幼兒時期,由于各種原因如知覺、運動、傳導(dǎo)及視中樞等原因未能接受適宜的視刺激,使視覺發(fā)育受到影響而發(fā)生的視覺功能減退的狀態(tài),主要表現(xiàn)為視力低下及雙眼單視功能障礙。近年來,左旋多巴(L-dopa)作為治療弱視的藥物,在國內(nèi)外的文獻報道其療效已獲得了一定的認(rèn)可。但L-dopa在人體內(nèi)代謝的過程中存在外周副作用較大、藥效波動范圍較大、耐受性差等缺點。鑒于前期實驗的基礎(chǔ),本實驗組將左旋多巴通過結(jié)構(gòu)改造,改造成其衍生物左旋多巴甲酯(LDME)。本研究的目的是通過給予不同劑量的左旋多巴甲酯,觀察其對剝奪性弱視貓模型的影響,對左旋多巴甲酯的作用機制進行探討,并評價其治療弱視的藥效學(xué)作用。 方法：初生家養(yǎng)幼貓(2-4周齡)30只隨機分為6組(每組5只)：左旋多巴甲酯高劑量組(LDMEH)、中劑量組(LDMEM)、低劑量組(LDMEL)、陽性藥左旋多巴對照組、正常對照組(NC)、弱視模型對照組(AC)。除了正常組外,于4周齡時參照Hubel經(jīng)典實驗方法對各組幼貓進行麻醉后的左眼單純上下瞼縫合建立剝奪性弱視。12周齡經(jīng)圖形視覺誘發(fā)電位(P-VEP)確定形成弱視后,灌胃給與左旋多巴甲酯20,40,80mg·kg-1，陽性對照組給與左旋多巴40mg·kg-1,正常對照組及模型組均給與等量生理鹽水。每天一次持續(xù)30天。 1、應(yīng)用圖形視覺誘發(fā)電位(P-VEP)研究左旋多巴甲酯對各組貓視皮質(zhì)電生理的影響；2、進行HE染色和透射電鏡觀察左旋多巴甲酯給藥組貓外側(cè)膝狀體形態(tài)學(xué)的變化；3、TUNEL檢測法觀察外側(cè)膝狀體神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況；4、免疫組織化學(xué)法檢測外側(cè)膝狀體中神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)的表達；5、Western-blot法檢測視外側(cè)膝狀體中NGF、c-Fos蛋白的表達。6、相對定量熒光PCR (Real time-PCR)法檢測外側(cè)膝狀體中c-fos mRNA的表達。 結(jié)果： 1、剝奪性弱視的視覺電生理研究 與正常對照組同側(cè)貓眼相比,剝奪性弱視模型組中剝奪眼的P-VEP波幅值明顯降低及P100值潛時延長,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與剝奪性弱視模型組相比,各藥物治療組中剝奪眼的P-VEP振幅有不同程度的升高且P100值潛時減少,其中左旋多巴甲酯高劑量組最為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示左旋多巴甲酯高劑量組通過提高P-VEP振幅和減少P100值潛時,使剝奪性弱視貓弱視眼的信號傳導(dǎo)功能得到改善。 2、外側(cè)膝狀體的形態(tài)學(xué)研究 模型組外側(cè)膝狀體的核漿比例降低和核移位,有些神經(jīng)元腫脹或變形,同時有膠質(zhì)細(xì)胞增生。大量細(xì)胞變性死亡；細(xì)胞核核膜模糊,核內(nèi)染色體邊集；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,線粒體數(shù)量減少,嵴不清晰。而經(jīng)左旋多巴和左旋多巴甲酯治療后,各組外側(cè)膝狀體神經(jīng)細(xì)胞變性死亡數(shù)目減少,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量增多,少見神經(jīng)元變形或腫脹現(xiàn)象,膠質(zhì)細(xì)胞少量出現(xiàn),核膜較模型組清晰,線粒體數(shù)目增加,嵴清晰,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張情況得到緩解。 3、左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓模型外側(cè)膝狀體神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)的影響 與剝奪性弱視模型組相比,左旋多巴對照組、左旋多巴甲酯高、中、低劑量組外側(cè)膝狀體中各層的內(nèi)源性nNOS免疫陽性細(xì)胞數(shù)量均有所增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與左旋多巴陽性組相比,高劑量組中的內(nèi)源性nNOS陽性細(xì)胞數(shù)多于左旋多巴陽性組,低于正常對照組,但兩組未見有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 4、左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓模型外側(cè)膝狀體細(xì)胞凋亡表達的影響 TUNEL染色細(xì)胞計數(shù)時發(fā)現(xiàn),在外側(cè)膝狀體中的TUNEL陽性細(xì)胞在相同時期內(nèi)表現(xiàn)出不同劑量下的左旋多巴甲酯治療效果。模型對照組中外側(cè)膝狀體細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示與正常對照組(很少的細(xì)胞凋亡)比較神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生了嚴(yán)重的DNA斷裂情況。治療后,給藥各組的凋亡細(xì)胞數(shù)量與模型對照組比較均有不同程度的減少。而左旋多巴甲酯高劑量組的逆轉(zhuǎn)細(xì)胞凋亡水平的作用最為明顯(P0.05)。正常組和模型對照組左側(cè)外膝體細(xì)胞凋亡水平分別為6.08%和37.25%(A層),兩數(shù)值間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。治療30天后,左旋多巴甲酯對左側(cè)外側(cè)膝狀神經(jīng)細(xì)胞發(fā)揮了一定的治療作用(P0.05)。 5、左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓模型外側(cè)膝狀體神經(jīng)生長因子(NGF)的影響 Western blot分析顯示,剝奪性弱視模型組外側(cè)膝狀體中的NGF蛋白的表達明顯少于正常組(P0.05)。與剝奪性弱視模型組相比,左旋多巴組與左旋多巴甲酯低、中、高給藥治療組外側(cè)膝狀體中NGF蛋白的表達有所增加,其中左旋多巴甲酯高劑量NGF蛋白表達水平最高(P0.05)。 6、左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓模型外側(cè)膝狀體中c-fos基因的影響 Western blot分析顯示,剝奪性弱視模型組外側(cè)膝狀體中的c-fos蛋白的表達明顯少于正常組(P0.05)。與剝奪性弱視模型組相比,各給藥治療組中的c-fos蛋白的表達逐漸增加。 7、左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓模型外側(cè)膝狀體c-fos mRNA表達的影響 RT-PCR結(jié)果顯示,與正常對照組相比較,剝奪性弱視模型組外側(cè)膝狀體c-fos mRNA表達水平明顯下調(diào),差異有顯著性(P0.05)。與弱視模型組相比,各給藥治療組外側(cè)膝狀體c-fos mRNA表達水平有所上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而其中左旋多巴甲酯高劑量組表達最為明顯(P0.05)。 結(jié)論： 1、左旋多巴甲酯能通過提高剝奪性弱視貓的P1oo波幅值減少P1oo波峰潛時和提升P100波幅值,使剝奪性弱視貓的視通路的信號傳導(dǎo)得到改善,從而恢復(fù)視覺功能。 2、給予左旋多巴甲酯進行治療后,剝奪弱視貓的外側(cè)膝狀體中的神經(jīng)元修復(fù)能力和再生能力有所提高,神經(jīng)細(xì)胞變性死亡數(shù)目減少,神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量增多。,少見神經(jīng)元變形或腫脹現(xiàn)象,膠質(zhì)細(xì)胞少量出現(xiàn),核膜較模型組清晰,線粒體數(shù)目增加,嵴清晰,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張情況得到緩解。 3、左旋多巴甲酯對弱視貓外側(cè)膝狀體的神經(jīng)細(xì)胞有效地進行抑制凋亡進程。 4、左旋多巴甲酯可使剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)的表達水平上調(diào)。 5、左旋多巴甲酯可使剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體經(jīng)細(xì)胞NGF的蛋白表達水平提高,這與改善P-VEP中各波值的效果是一致的。 6、左旋多巴甲酯可明顯增加剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體c-Fos蛋白的表達。 7、左旋多巴甲酯可使剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體c-fos mRNA水平的上調(diào)。 8、左旋多巴甲酯可使剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體的功能得到恢復(fù),可作為治療弱視的潛在藥物。其治療的機制可能與其能調(diào)控外側(cè)膝狀體NGF、 nNOS、c-fos的表達、提高神經(jīng)元的修復(fù)和再生能力、抑制細(xì)胞凋亡的有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：剝奪性弱視 貓 外側(cè)膝狀體 NGF nNOS c-fos
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R965;R777.44
【目錄】：

• 本文主要中英文對照說明5-6
• 摘要6-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-19
• 第一部分 左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓視覺誘發(fā)電位的研究19-26
• 1 材料與方法19-20
• 2 結(jié)果20-22
• 3 討論22-24
• 參考文獻24-26
• 第二部分 左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體的組織學(xué)研究26-31
• 1 材料與方法26-27
• 2 實驗結(jié)果27-28
• 3 討論28-29
• 參考文獻29-31
• 第三部分 左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體一氧化氮合酶(nNOS)的影響31-38
• 1 材料與方法31-32
• 2 結(jié)果32-35
• 3 討論35-36
• 參考文獻36-38
• 第四部分 左旋多巴甲酯對剝奪性弱視貓外側(cè)膝狀體神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響38-45
• 1 材料與方法38-39
• 2 結(jié)果39-42
• 3 討論42-43
• 參考文獻43-45
• 第五部分 左旋多巴甲酯剝對奪性弱視貓外側(cè)膝狀體神經(jīng)因子NGF的影響45-53
• 1 材料與方法45-47
• 2 結(jié)果47-48
• 3 討論48-50
• 參考文獻50-53
• 第六部分 左旋多巴甲酯剝對奪性弱視貓外側(cè)膝狀體c-Fos表達的影響53-60
• 1 材料與方法53-55
• 2 結(jié)果55-56
• 3 討論56-58
• 參考文獻58-60
• 第七部分 左旋多巴甲酯剝對奪性弱視貓外側(cè)膝狀體c-fos mRNA表達的影響60-67
• 1 材料與方法60-63
• 2 結(jié)果63-64
• 3 討論64-65
• 參考文獻65-67
• 綜述67-72
• 參考文獻72-77
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文77-78
• 攻讀碩士學(xué)位期間獲得的科研項目78-79
• 致謝79

【參考文獻】

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本文編號：974512