本文關(guān)鍵詞：突變型Rad50腺病毒載體的制備及其在人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1中的最適感染量測定

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【摘要】：目的:測定攜帶突變型Rad50基因的重組腺病毒載體Ad-Rad50-GFP在人鼻咽癌細(xì)胞株CNE1中的表達(dá)及其對CNE1的最適感染倍率(MOI)。方法:終點(diǎn)稀釋法測定Ad-Rad50-GFP生物滴度,細(xì)胞生長曲線觀察重組腺病毒載體對CNE1生長的影響,熒光顯微鏡下計算重組腺病毒載體的轉(zhuǎn)染效率;免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測以最適感染量感染后CNE1細(xì)胞內(nèi)突變型Rad50蛋白的表達(dá)。結(jié)果:Ad-Rad50-GFP生物滴度為1.26×10~(11)pfu/ml,重組腺病毒載體以不高于50的感染倍率轉(zhuǎn)染時對CNE1生長無明顯影響,且MOI=50時轉(zhuǎn)染24h后GFP表達(dá)水平最高,可檢出高表達(dá)的突變型Rad50蛋白,在轉(zhuǎn)染72h后仍維持約70%的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)論:重組腺病毒載體Ad-Rad50-GFP能有效轉(zhuǎn)染CNE1細(xì)胞并使其表達(dá)突變型Rad50蛋白,MOI=50為Ad-Rad50-GFP對CNE1的最適感染倍率。
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科;廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院耳鼻咽喉科;廣東省佛山市南海婦幼保健院耳鼻咽喉科;
【關(guān)鍵詞】： 重組腺病毒 鼻咽腫瘤 感染倍率
【基金】：廣東省對外合作項目(No:2012B050600015)
【分類號】：R739.63
【正文快照】： 放射治療是臨床上鼻咽癌的首選治療方法。放射線照射細(xì)胞引起DNA損傷,由Mre11、Rad50、Nbs1三種蛋白組成的MRN復(fù)合體是細(xì)胞內(nèi)修復(fù)DNA損傷的重要組分〔1-2〕,其中Rad50蛋白結(jié)構(gòu)的完整性對MRN復(fù)合體的形成及其功能起關(guān)鍵性作用。隨著基因治療在疾病治療上的應(yīng)用,通過腺病毒載體

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本文編號：963678