本文關鍵詞：ADP-核糖基化因子抑制劑在堿燒傷誘導實驗性角膜新生血管中作用的研究

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【摘要】：背景與目的 角膜在正常生理狀態(tài)下是透明無血管組織，但在感染、機械損傷、化學傷及其他病理情況下，可以誘導角膜新生血管(corneal neovascularization, CRNV)形成，致角膜失去透明性而引起嚴重的視力障礙，最終導致失明。因此有效阻止角膜新生血管的發(fā)生是治愈角膜損傷和恢復視力的重要途徑。探索和尋找副作用小、抑制角膜新生血管能力強的方法和手段是眼科學研究的重點和熱點課題之一。ADP-核糖基化因子（ADP-ribosylation factor, ARF）是囊泡運輸中的重要調節(jié)因子，屬于三磷酸鳥苷（quanosine triphosphate GTP）結合蛋白，參與了細胞內物質運輸和信號轉導過程。目前關于ARF的功能研究主要集中于腫瘤方面，認為ARF蛋白是腫瘤細胞增殖和代謝的重要調控分子，而其在新生血管性眼病以及CRNV中的作用及其機制的研究國內外報道甚少。因此，本實驗從構建堿燒傷誘導CRNV模型著手，通過應用ARF抑制劑腹腔注射法干預實驗小鼠以及細胞增殖、遷移體內、體外等實驗手段，探討ARF抑制劑在角膜新生血管發(fā)生過程中的作用和機制，為臨床治療CRNV提供有益的理論依據。 材料與方法 1.采用浸潤1mol/L NaOH的2×2mm濾紙貼附左眼角膜中央40s的方法制作小鼠角膜堿燒傷誘導CRNV模型，將36只BALB/c小鼠堿燒傷后將其隨機分為實驗組及對照組，角膜堿燒傷1w后開始，實驗組每只小鼠腹腔注射0.5ml質量濃度為0.5mg/ml ARF抑制劑溶液，對照組每只小鼠給予腹腔注射0.5ml PBS緩沖液，各自每周3次，持續(xù)1周。實驗組及對照組于造模后2w分離角膜組織，以CD31免疫熒光標記法標記新生血管，比較對照組及實驗組CRNV面積。 2.收集第0d、4d、7d以及2w小鼠的角膜組織，用Realtime-PCR法檢測角膜堿燒傷后不同時間點ARF基因的動態(tài)表達。用Western blot法檢測堿燒傷角膜組織內血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）mRNA的表達情況。 3.體外實驗應用ARF抑制劑干預人視網膜血管內皮細胞（human retinalendothelial cell, HREC），檢測其對細胞增殖、遷移等的影響。 結果 1.對照組小鼠CRNV占角膜總面積的比例為0.71±0.20，ARF抑制劑干預組小鼠CRNV面積為0.53±0.44，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（t=3.504，P=0.025）。 2.與0d比較，堿燒傷后對照組和ARF抑制劑干預組ARF基因水平的表達均有升高趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義（F時間=1229.698, P=0.000）。 3. ARF抑制劑干預組VEGF的蛋白水平表達較對照組同期值明顯降低，（t=3.308,P=0.030）。 4.細胞增殖實驗結果顯示：ARF抑制劑能明顯抑制HREC細胞系的增殖，并隨藥物濃度的升高，抑制效應隨之升高的劑量依賴性表現(xiàn)（F=798.222, P總=0.000）。 5.劃痕修復實驗結果顯示：在12h各組HREC細胞遷移寬度無明顯差異。但在24h時間點，100ng/ml和1,000ng/ml兩個濃度的ARF抑制劑干預組HREC遷移寬度分別為6.46±2.32μm、5.4±1.68μm，與對照組（8.49±4.18）μm相比明顯減小，，差異具有統(tǒng)計學意義(P_1=0.49, P_2=0.14)。 結論 1.角膜堿燒傷后，ARF抑制劑通過阻斷ARF信號通路抑制VEGF等分子的表達等途徑抑制角膜新生血管的生成。 2. ARF抑制劑能明顯抑制HREC細胞系體外的增殖和遷移能力。
【關鍵詞】：ADP-核糖基化因子抑制劑 角膜堿燒傷 角膜新生血管 血管內皮生長因子 內皮細胞
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R772.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 第一部分 ARF 抑制劑的應用對堿燒傷誘導 CRNV 中的影響12-32
• 材料與儀器13-15
• 實驗方法15-23
• 結果23-26
• 討論26-28
• 結論28-29
• 參考文獻29-31
• 附圖31-32
• 第二部分 ARF 抑制劑體外干預對 HREC 細胞體外生物學功能的影響32-43
• 材料與儀器32-35
• 結果35-37
• 討論37-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-43
• 全文總結43-44
• 綜述44-50
• 參考文獻48-50
• 英文縮略詞表50-51
• 攻讀學位期間公開發(fā)表的論文51-52
• 本研究所獲得基金資助52-53
• 致謝53-54

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前7條

1 陳琳;Fas/FasL與眼新生血管[J];國外醫(yī)學.眼科學分冊;2001年06期

2 孫重;柯敏;;MMP、TGF-β1在翼狀胬肉中的表達及其意義[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2007年01期

3 鄭根主;鄭琦;許燕紅;;翼狀胬肉發(fā)病機制和治療的研究進展[J];河北醫(yī)藥;2011年14期

4 王發(fā)渭;黃泉智;許成勇;孫志高;陳利平;胡亞卓;韓志濤;;TUNEL法檢測抑郁模型大鼠海馬細胞凋亡的改進及應用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2012年17期

5 張鵬,王雨生,惠延年,白建偉,胡丹;缺氧誘導因子1與眼內新生血管[J];眼科新進展;2004年03期

6 李淑琳;;翼狀胬肉發(fā)病機制的研究進展[J];眼科研究;2009年03期

7 陳文列;洪振豐;李天驕;趙錦燕;林久茂;周建衡;黃美雅;;粗葉懸鉤子總生物堿抑制肝細胞凋亡的超微結構與TUNEL染色觀察[J];中國中藥雜志;2010年08期

本文編號：955816