本文關(guān)鍵詞：ADP-核糖基化因子抑制劑在堿燒傷誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性角膜新生血管中作用的研究

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【摘要】：背景與目的 角膜在正常生理狀態(tài)下是透明無(wú)血管組織，但在感染、機(jī)械損傷、化學(xué)傷及其他病理情況下，可以誘導(dǎo)角膜新生血管(corneal neovascularization, CRNV)形成，致角膜失去透明性而引起嚴(yán)重的視力障礙，最終導(dǎo)致失明。因此有效阻止角膜新生血管的發(fā)生是治愈角膜損傷和恢復(fù)視力的重要途徑。探索和尋找副作用小、抑制角膜新生血管能力強(qiáng)的方法和手段是眼科學(xué)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)課題之一。ADP-核糖基化因子（ADP-ribosylation factor, ARF）是囊泡運(yùn)輸中的重要調(diào)節(jié)因子，屬于三磷酸鳥苷（quanosine triphosphate GTP）結(jié)合蛋白，參與了細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。目前關(guān)于ARF的功能研究主要集中于腫瘤方面，認(rèn)為ARF蛋白是腫瘤細(xì)胞增殖和代謝的重要調(diào)控分子，而其在新生血管性眼病以及CRNV中的作用及其機(jī)制的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道甚少。因此，本實(shí)驗(yàn)從構(gòu)建堿燒傷誘導(dǎo)CRNV模型著手，通過應(yīng)用ARF抑制劑腹腔注射法干預(yù)實(shí)驗(yàn)小鼠以及細(xì)胞增殖、遷移體內(nèi)、體外等實(shí)驗(yàn)手段，探討ARF抑制劑在角膜新生血管發(fā)生過程中的作用和機(jī)制，為臨床治療CRNV提供有益的理論依據(jù)。 材料與方法 1.采用浸潤(rùn)1mol/L NaOH的2×2mm濾紙貼附左眼角膜中央40s的方法制作小鼠角膜堿燒傷誘導(dǎo)CRNV模型，將36只BALB/c小鼠堿燒傷后將其隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，角膜堿燒傷1w后開始，實(shí)驗(yàn)組每只小鼠腹腔注射0.5ml質(zhì)量濃度為0.5mg/ml ARF抑制劑溶液，對(duì)照組每只小鼠給予腹腔注射0.5ml PBS緩沖液，各自每周3次，持續(xù)1周。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組于造模后2w分離角膜組織，以CD31免疫熒光標(biāo)記法標(biāo)記新生血管，比較對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組CRNV面積。 2.收集第0d、4d、7d以及2w小鼠的角膜組織，用Realtime-PCR法檢測(cè)角膜堿燒傷后不同時(shí)間點(diǎn)ARF基因的動(dòng)態(tài)表達(dá)。用Western blot法檢測(cè)堿燒傷角膜組織內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）mRNA的表達(dá)情況。 3.體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)用ARF抑制劑干預(yù)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（human retinalendothelial cell, HREC），檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖、遷移等的影響。 結(jié)果 1.對(duì)照組小鼠CRNV占角膜總面積的比例為0.71±0.20，ARF抑制劑干預(yù)組小鼠CRNV面積為0.53±0.44，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.504，P=0.025）。 2.與0d比較，堿燒傷后對(duì)照組和ARF抑制劑干預(yù)組ARF基因水平的表達(dá)均有升高趨勢(shì)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F時(shí)間=1229.698, P=0.000）。 3. ARF抑制劑干預(yù)組VEGF的蛋白水平表達(dá)較對(duì)照組同期值明顯降低，（t=3.308,P=0.030）。 4.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：ARF抑制劑能明顯抑制HREC細(xì)胞系的增殖，并隨藥物濃度的升高，抑制效應(yīng)隨之升高的劑量依賴性表現(xiàn)（F=798.222, P總=0.000）。 5.劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在12h各組HREC細(xì)胞遷移寬度無(wú)明顯差異。但在24h時(shí)間點(diǎn)，100ng/ml和1,000ng/ml兩個(gè)濃度的ARF抑制劑干預(yù)組HREC遷移寬度分別為6.46±2.32μm、5.4±1.68μm，與對(duì)照組（8.49±4.18）μm相比明顯減小，，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P_1=0.49, P_2=0.14)。 結(jié)論 1.角膜堿燒傷后，ARF抑制劑通過阻斷ARF信號(hào)通路抑制VEGF等分子的表達(dá)等途徑抑制角膜新生血管的生成。 2. ARF抑制劑能明顯抑制HREC細(xì)胞系體外的增殖和遷移能力。
【關(guān)鍵詞】：ADP-核糖基化因子抑制劑 角膜堿燒傷 角膜新生血管 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R772.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 第一部分 ARF 抑制劑的應(yīng)用對(duì)堿燒傷誘導(dǎo) CRNV 中的影響12-32
• 材料與儀器13-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-23
• 結(jié)果23-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 附圖31-32
• 第二部分 ARF 抑制劑體外干預(yù)對(duì) HREC 細(xì)胞體外生物學(xué)功能的影響32-43
• 材料與儀器32-35
• 結(jié)果35-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 全文總結(jié)43-44
• 綜述44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 英文縮略詞表50-51
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文51-52
• 本研究所獲得基金資助52-53
• 致謝53-54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：955816