本文關鍵詞：肺炎鏈球菌和不可分型流感嗜血桿菌二次感染誘導急性中耳炎模型的機制研究

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【摘要】：目的 建立一種肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae, S.pn）定植在鼻腔后，以不可分型流感嗜血桿菌（Nontypeable haemophilus influenzae,NTHi）二次感染，接種至小鼠鼓室內引起急性中耳炎（Acute OtisisMedia, AOM）模型的實驗方法。并以此為對象對二次感染機制進行研究。 方法 1.選擇健康SPF級C57BL/6J小鼠，用注射器刺穿鼓膜向鼓室中接種106、107、108CFU/耳三種濃度的NTHi作為實驗組，，以向鼓室中注射PBS的小鼠為對照組。建模后每日稱重并觀測小鼠日常行為及狀態(tài)。建模后1、3、5、7天時，各組分別處死，采集血清及中耳灌洗液上清用ELISA檢測細胞因子，取中耳灌洗液中細胞進行流式細胞術觀察，取聽泡固定并脫鈣，進行石蠟切片并作HE染色。從各方面判定急性中耳炎模型是否建立成功。 2.先以S.pn19F給C57BL/6J小鼠滴鼻，以便S.pn在鼻腔定植，然后再經(jīng)鼓膜穿刺注入NTHi，建立二次感染中耳炎模型，觀察小鼠日常行為及稱重，取心臟血和中耳灌洗液進行細菌培養(yǎng)，計數(shù)中耳灌洗液中細胞數(shù)量，并檢測中耳灌洗液上清和血清中的細胞因子含量變化。 結果 1.體重：PBS組Day1有少許下降，之后穩(wěn)步上升，而NTHi組則Day1、Day2體重下降之后延遲到Day3體重才開始恢復。細胞計數(shù)中可見炎性細胞浸潤主要以中性粒細胞為主，可達99%，但PBS組中細胞總數(shù)遠遠小于NTHi各組。中耳組織切片可以見到膿性物滲出，大量炎癥細胞浸潤，偶見中耳骨結構遭破壞，血清及中耳灌洗液中細胞因子：中耳灌洗液上清中IL-6和TNFα升高，而血清中各細胞因子無變化。 2.體重：coIF組小鼠在滴鼻后，體重有所下降，但在于NTHi同時接受鼓膜穿刺后，體重下降水平相同，無統(tǒng)計學差異。細菌清除能力：coIF組小鼠與NTHi組小鼠中耳腔中細菌清除能力無差異。細胞計數(shù)：coIF組中耳腔中的炎性細胞募集增多。細胞因子：同時IL-1β及TNF-α的表達均高于NTHi組。 結論 本研究成功建立了NTHi致急性中耳炎模型以及S.pn與NTHi二次感染致急性中耳炎模型，并對該模型中耳微環(huán)境中的炎癥細胞和炎癥因子進行了檢測，為后續(xù)研究微生物與微生物、多種微生物與宿主之間的相互影響打下了基礎。
【關鍵詞】：NTHi S.pn 二次感染 急性中耳炎
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R764.21
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 第一部分 NTHi 誘導急性中耳炎的模型建立11-23
• 前言11-12
• 1 實驗材料12-14
• 2 實驗方法14-16
• 3 實驗結果16-21
• 4 討論21-23
• 第二部分 NTHi 與 S.pn 二次感染誘導急性中耳炎的模型建立23-32
• 前言23-24
• 1 實驗材料24-25
• 2 實驗方法25-26
• 3 實驗結果26-30
• 4 討論30-32
• 全文總結32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述：分泌性中耳炎中相關細胞因子功能的研究進展36-42
• 參考文獻40-42
• 致謝42-43
• 攻讀學位期間的研究成果及發(fā)表的學術論文目錄43-44

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本文編號：936066