本文關(guān)鍵詞：沉默信號(hào)調(diào)控因子1蛋白促進(jìn)高糖環(huán)境下角膜上皮細(xì)胞損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 沉默信號(hào)調(diào)控因子1 1型糖尿病 糖尿病角膜病變 上皮修復(fù)

【摘要】：第一部分沉默信號(hào)調(diào)控因子1(Sirtl)在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá) 目的：探討沉默信號(hào)調(diào)控因子(Sirt1)在1型糖尿病模型C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的角膜和三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá),為明確Sirt1與糖尿病性角膜病變的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。 方法：取雄性C51BL/6-Ins2Akita+/J小鼠與同窩出生的野生型雄性C57BL/6-Ins2-/+小鼠各8只,分別作為1型糖尿病模型組和正常對(duì)照組。分別于24周齡、28周齡、32周齡、36周齡、40周齡、44周齡、48周齡測(cè)量?jī)山M小鼠的體重、血糖、淚液分泌情況,同時(shí)行虎紅染色觀察淚膜及上皮情況；于48周齡時(shí)頸椎脫臼法處死,取小鼠的三叉神經(jīng)節(jié)和角膜組織。采用蘇木素-伊紅染色顯示兩組小鼠的角膜和三叉神經(jīng)節(jié)的組織病理學(xué)變化；行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)角膜和三義神經(jīng)節(jié)中Sirt1蛋白的表達(dá)和定位；行熒光定量PCR法檢測(cè)Sirt1mRNA在角膜和三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)；行Western blot檢測(cè)兩組小鼠角膜和三叉神經(jīng)節(jié)中Sirt1蛋白的相對(duì)表達(dá)量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：與C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠相比,C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的體重明顯較輕(t=22.784,P=0.000),淚液分泌減少(t=10.693,P=0.000),虎紅染色著色明顯。C57BL/6-Ins2Akita+J小鼠的三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小不均勻,排列較疏松,神經(jīng)纖維排列較散亂,角膜上皮變薄、細(xì)胞層數(shù)減少；而C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小、形態(tài)較為均一,排列緊密、整齊,神經(jīng)纖維排列較整齊。熒光定量PCR顯示,Sirt1mRNA在C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于野生型C57BL/6-Ins2+/+小鼠(0.53±0.08vs.0.97±0.12),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-5.863,P=0.003)；在C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠三義神經(jīng)節(jié)的表達(dá)灰度為2.43±0.19,低于野生型C57BL/6-Ins2+/+小鼠(2.50±0.23),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.582,P=0.611).Western blot顯示,C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜中Sirt1蛋白的表達(dá)明顯低于野生型C57BL/6-Ins2+/+小鼠(0.778±0.017vs.1.306±0.014),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=33.141,P=0.001)；但Sirt1蛋白在兩組小鼠的三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.100±0.016vs.1.108±0.018,t=0.431,P=0.708). 結(jié)論：Sirt1在48周齡1型糖尿病C51BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的角膜中的表達(dá)降低,提示Sirt1有可能參與糖尿病性角膜病變。 第二部分過(guò)量表達(dá)Sirt1蛋白對(duì)高糖環(huán)境下角膜上皮損傷修復(fù)的影響 目的：研究Sirt1對(duì)高糖環(huán)境下角膜上皮損傷修復(fù)的影響及其作用機(jī)制。 方法：取雄性C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠20只與同窩出生的野生型雄性C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠5只分成五組：C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠角膜損傷不處理組、C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜損傷不處理組、C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜損傷結(jié)膜下注射生理鹽水組(1OuL)、C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜損傷結(jié)膜下注射Ad-GFP組(10uL滴度為1011的重組GFP腺病毒)和C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜損傷結(jié)膜下注射Ad-Sirt1組(10uL滴度為1011的重組Sirt1腺病毒)。角膜上皮刮除后,立即結(jié)膜下注射相應(yīng)物質(zhì)。損傷48h后,通過(guò)Western blot分別比較前兩組之問(wèn)、后四組之間小鼠角膜組織中乙酰化p53、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3蛋白)、胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)、乙�；牡鞍准っ窧 (p-AKT)等蛋白的表達(dá)量,進(jìn)而顯示過(guò)量表達(dá)Sirt1對(duì)C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜組織中p53、IGFBP3/IGF-1/AKT的表達(dá)的影響。通過(guò)熒光素鈉染色并分別于傷后0h、24h、48h裂隙等下觀察并照相顯示過(guò)量表達(dá)Sirt1對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復(fù)的影響。 結(jié)果：糖尿病小鼠角膜上皮刮除后,熒光素鈉染色結(jié)果表明結(jié)膜下注射重組SIRT1腺病毒的糖尿病小鼠48小時(shí)后角膜上皮損傷愈合的面積顯著低于未進(jìn)行SIRT1腺病毒注射組,說(shuō)明過(guò)量表達(dá)Sirt1后促進(jìn)了糖尿病小鼠角膜的損傷修復(fù)。與野生型小鼠相比,糖尿病小鼠的角膜組織中乙酰化p53、IGFBP3蛋白表達(dá)明顯上調(diào),而Sirt1、IGF-1R、p-AKT顯著下調(diào)。結(jié)膜下注射重組SIRT1腺病毒的C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的角膜組織中乙�；痯53、IGFBP3蛋白表達(dá)較未注射時(shí)顯著下調(diào),而IGF-1R、乙酰化ATK蛋白表達(dá)顯著增加,其表達(dá)量均與野生型小鼠相當(dāng)。 結(jié)論：Sirt1通過(guò)抑制p53乙酰化調(diào)控IGFBP3/IGF-1/AKT通路,進(jìn)而促進(jìn)角膜上皮修復(fù)。Sirt1對(duì)糖尿病角膜病變有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：沉默信號(hào)調(diào)控因子1 1型糖尿病 糖尿病角膜病變 上皮修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R772.2
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-9
• 第一部分 沉默信號(hào)調(diào)控因子1(Sirt1)在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)9-33
• 引言9-11
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料和試劑11-13
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物11
• 1.2 儀器11
• 1.3 試劑11-13
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)步驟13-20
• 2.1 動(dòng)物模型及分組13
• 2.2 小鼠體重、血糖的觀察13
• 2.3 小鼠淚液分泌的觀察13
• 2.4 1%虎紅染色角膜上皮損害檢測(cè)13
• 2.5 蘇木素-伊紅染色檢測(cè)三叉神經(jīng)節(jié)與角膜的組織病理學(xué)該變13-14
• 2.6 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Sirt1的表達(dá)14-15
• 2.7 SYBR real time PCR法檢測(cè)Sirt1 mRNA的表達(dá)15-17
• 2.8 Western blot檢測(cè)角膜和三叉神經(jīng)節(jié)中Sirt1蛋白的表達(dá)17-19
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19-20
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-28
• 3.1 小鼠體重的變化20-21
• 3.2 小鼠血糖變化情況21
• 3.3 小鼠淚液分泌的觀察21-22
• 3.4 1%虎紅染色情況22-23
• 3.5 蘇木精-伊紅染色檢測(cè)三叉神經(jīng)節(jié)與角膜組織的改變23-25
• 3.6 Sirtl蛋白在兩組小鼠角膜中的表達(dá)25
• 3.7 熒光定量PCR法檢測(cè)Sirt1 mRNA的表達(dá)25-26
• 3.8 Westorn blot檢測(cè)Sirt1蛋白的表達(dá)26-28
• 第四章 討論28-30
• 4.1 小鼠模型的選擇28
• 4.2 1%虎紅角膜染色在糖尿病角膜病變中的意義28
• 4.3 檢測(cè)Sirt1蛋白的意義28-30
• 第五章 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 第二部分 過(guò)量表達(dá)Sirt1蛋白對(duì)高糖環(huán)境下角膜上皮損傷修復(fù)的影響33-45
• 引言33-35
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料和試劑35-36
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物35
• 1.2 儀器35
• 1.3 試劑35-36
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)步驟36-37
• 2.1 動(dòng)物模型及分組36
• 2.2 模型的建立36
• 2.3 熒光素鈉染色36
• 2.4 Sirt1、p53以及IGFBP3/IGF-1/AKT通路的檢測(cè)36
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理36-37
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-40
• 3.1 熒光素鈉染色角膜上皮損傷檢測(cè)37-38
• 3.2 Western blot檢測(cè)小鼠角膜各因子表達(dá)38-40
• 第四章 討論40-42
• 第五章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 綜述45-54
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果54-55
• 致謝55-56

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊明華;楊蘇蓓;柴可夫;金祖漢;陳婉姬;;四氧嘧啶致小鼠糖尿病造模條件優(yōu)化及穩(wěn)定性考察[J];中藥藥理與臨床;2007年05期

2 范紅斌;李英;包菊平;邱麗穎;程建青;楊志勇;杜斌;;冰醋酸致小鼠實(shí)驗(yàn)性腹膜炎模型的研究[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2007年06期

3 郭偉;李孟榮;肖建軍;黃敏;;塵螨過(guò)敏性哮喘小鼠模型的建立與評(píng)估[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2008年05期

4 杜曉棠;陳雪松;張美娟;季e鹲，

本文編號(hào)：885805