發(fā)布時(shí)間：2017-09-19 19:19

  本文關(guān)鍵詞：鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞生物學(xué)特性研究

  更多相關(guān)文章： 鼻咽癌 放療抗拒 紫杉醇耐藥 侵襲 轉(zhuǎn)移 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化

【摘要】：目的：研究鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs放療抗拒性、紫杉醇敏感性及侵襲轉(zhuǎn)移能力,并在課題組前期研究基礎(chǔ)上通過體外實(shí)驗(yàn)對(duì)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞生物學(xué)特性的相關(guān)性進(jìn)行初步探討。 方法：一、以鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs及其親本細(xì)胞CNE-2為研究對(duì)象,檢測鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞生物學(xué)特性：(1)CCK-8法、克隆形成實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)檢測鼻咽癌細(xì)胞放療抗拒性；(2)CCK-8細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測鼻咽癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性；(3)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)及Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測鼻咽癌細(xì)胞體外遷移及侵襲能力。 二、顯微鏡觀察鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs形態(tài)學(xué)改變；Western Blot檢測鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs及親本細(xì)胞CNE-2上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物表達(dá)情況,及鼻咽癌放療前及放療后殘留組織標(biāo)本EMT分子標(biāo)志物表達(dá)水平。 結(jié)果：一、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs較其親本細(xì)胞具有更強(qiáng)的放療抗拒性：CNE-2-Rs細(xì)胞在4Gy、6Gy和8Gy不同放射劑量下均表現(xiàn)出更高的生存率(P均0.01)；給予同一放射劑量,CNE-2-Rs細(xì)胞在第2天便出現(xiàn)更高的生存率(P均0.05),且差異隨天數(shù)逐漸增大；克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示CNE-2-Rs細(xì)胞較親本細(xì)胞形成的克隆更大、數(shù)目更多；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,給予4Gy放射線照射,72小時(shí)后CNE-2-Rs細(xì)胞凋亡率明顯低于CNE-2細(xì)胞(22.43±0.18%vs38.07±0.66%,P0.001)；而CNE-2-Rs與親本細(xì)胞在未照射時(shí)細(xì)胞周期分布無差異,但給予4Gy放射線照射,72h后CNE-2-Rs細(xì)胞較親本細(xì)胞處于S期(28.78±1.72vs21.42±1.09,P0.05)和G2期(37.34+3.68vs24.66±1.68,P0.05)細(xì)胞比例增多,處于G1期細(xì)胞減少(33.88±5.38vs53.91±1.6,P0.05)。 二、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs獲得了更強(qiáng)的紫杉醇耐藥性：CNE-2-Rs和CNE-2細(xì)胞的紫杉醇藥物IC50分別為8.53±3.61×10-1及6.28±2.37x10-2(nM)(P0.001),CNE-2-Rs細(xì)胞的紫杉醇耐藥指數(shù)為13.57±1.58。 三、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs獲得了更強(qiáng)的體外遷移及侵襲能力：劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞劃痕愈合能力明顯增強(qiáng)；Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)顯示與親本細(xì)胞CNE-2相比,CNE-2-Rs細(xì)胞穿過Transwell小室的細(xì)胞數(shù)更多(86±6vs26±8)(P0.01)。 四、鼻咽癌放療抗拒細(xì)胞CNE-2-Rs及放療后殘留組織發(fā)生EMT改變：(1)放射線照射后CNE-2細(xì)胞失去了原本多邊形緊密相連的上皮細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞變長并伴有偽足形成,細(xì)胞連接疏松,呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。提示與CNE-2相比,CNE-2-Rs細(xì)胞發(fā)生了典型的EMT形態(tài)學(xué)改變。(2)與CNE-2細(xì)胞相比,CNE-2-Rs細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin明顯下調(diào),而間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin明顯上調(diào)。(3)與放療前的組織標(biāo)本相比,放療后鼻咽癌殘留組織中上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)顯著下調(diào),而相反間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin的表達(dá)則顯著升高。 結(jié)論：鼻咽癌放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞較其親本細(xì)胞獲得了更強(qiáng)的放療抗拒、紫杉醇耐藥及體外運(yùn)動(dòng)侵襲能力。放射線照射篩選放療抗拒細(xì)胞,使得最終獲得的放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞發(fā)生了典型的EMT形態(tài)學(xué)及分子標(biāo)志物改變。該研究結(jié)果提示EMT改變可能與鼻咽癌細(xì)胞放療抗拒、侵襲轉(zhuǎn)移及紫杉醇耐藥三種惡性生物學(xué)行為進(jìn)展密切相關(guān),為今后從同一個(gè)視角研究鼻咽癌上述三種惡性生物學(xué)行為奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 放療抗拒 紫杉醇耐藥 侵襲 轉(zhuǎn)移 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 縮略詞表13-14
• 1 前言14-16
• 2 材料與方法16-23
• 2.1 細(xì)胞株及鼻咽癌組織16
• 2.2 主要試劑及耗材16-17
• 2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法18-23
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代18
• 2.4.2 細(xì)胞放療方法18
• 2.4.3 CCK-8法18-19
• 2.4.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)19
• 2.4.5 流式細(xì)胞術(shù)19-20
• 2.4.6 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)20
• 2.4.7 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)20
• 2.4.8 鼻咽癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察20-21
• 2.4.9 細(xì)胞/組織總蛋白提取21
• 2.4.10 細(xì)胞(組織)總蛋白濃度測定21
• 2.4.11 SDS-PAGE電泳及蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)21-22
• 2.4.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 3 結(jié)果23-25
• 3.1 放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞及其親本細(xì)胞放療差異性檢測23
• 3.2 放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞及其親本細(xì)胞紫杉醇敏感性檢測23
• 3.3 放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞及其親本細(xì)胞體外遷移及侵襲能力比較23-24
• 3.4 放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞發(fā)生EMT形態(tài)學(xué)改變24
• 3.5 放療抗拒CNE-2-Rs細(xì)胞發(fā)生EMT經(jīng)典分子標(biāo)志物改變24
• 3.6 鼻咽癌放療抗拒標(biāo)本EMT分子標(biāo)志物的差異表達(dá)24-25
• 4 討論25-28
• 5 結(jié)論28-29
• 附圖29-33
• 參考文獻(xiàn)33-40
• 綜述40-54
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 攻讀學(xué)位期間主要研究成果目錄54-55
• 致謝55-56

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：883445