本文關(guān)鍵詞：Neuroserpin對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護(hù)功能及其作用機制的研究

  更多相關(guān)文章： Neuroserpin 視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷 細(xì)胞凋亡 組織型纖溶酶原激活劑

【摘要】：目的：Neuroserpin作為一種功能性的絲氨酸蛋白酶抑制劑,在中樞發(fā)揮重要的神經(jīng)保護(hù)功能,并且其神經(jīng)保護(hù)功能是否跟其組織型纖溶酶原激活劑的抑制活性相關(guān)頗受爭議。本課題旨在探討NSP對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護(hù)功能及其保護(hù)功能是否依賴于對組織型纖溶酶原激活劑的抑制。方法：本課題主要使用了野生鼠(WT)和tPA基因敲除鼠(tPA-/-)。先采用微量注射器對成年鼠玻璃體腔注射lul的NSP或者時等體積胎牛血清(BSA)對照液,然后采用前房灌注系統(tǒng)急性升高眼內(nèi)壓至120mmhg并持續(xù)60mins,建立視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型。在建模之后1天、7天采用ERG技術(shù)對缺血再灌注損傷后視網(wǎng)膜功能進(jìn)行評估,采用TUNEL染色對視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)進(jìn)行評估,同時采用蛋白印記(western blot)技術(shù)對視網(wǎng)膜caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、 cleaved caspase-9、caspase-8、cleaved caspase-8、PARP及cleaved PARP進(jìn)行測量。最后,采用免疫熒光技術(shù)和western blot技術(shù)探究NSP在視網(wǎng)膜缺血灌注注損傷中的表達(dá)及其表達(dá)的分布。結(jié)果：通過實驗發(fā)現(xiàn),視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷導(dǎo)致嚴(yán)重的視網(wǎng)膜功能損害和視網(wǎng)膜神經(jīng)元凋亡,而預(yù)先玻璃體腔預(yù)注射NSP顯著保護(hù)視網(wǎng)膜損傷,而且NSP的視網(wǎng)膜保護(hù)功能在WT和tPA-/-鼠中相似。同時實驗發(fā)現(xiàn)在缺血損傷的視網(wǎng)膜中,caspase-3, caspase-9、PARP顯著激活,而NSP能抑制其激活,NSP對這些蛋白的抑制在WT和tPA-/-鼠中也是相似的。NSP在正常視網(wǎng)膜中基本上不表達(dá),而在視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后顯著表達(dá)并主要分布于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。結(jié)論：因此我們提出,NSP可以保護(hù)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷,這種保護(hù)功能不依賴于對組織型纖溶酶原激活劑的抑制,而且可能是通過抑制caspase-3激活來發(fā)揮視網(wǎng)膜保護(hù)功能。
【關(guān)鍵詞】：Neuroserpin 視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷 細(xì)胞凋亡 組織型纖溶酶原激活劑
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表3-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-9
• 前言9-19
• 參考文獻(xiàn)12-19
• 第一部分 Neuroserpin在視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)與分布19-27
• 目的19
• 材料19-20
• 1. 實驗動物19
• 2. 主要試劑19
• 3. 主要設(shè)備和儀器19-20
• 4. 藥物和溶液配制20
• 方法20-24
• 1. 視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型的制備20-21
• 2. 視網(wǎng)膜組織Neuroserpin的表達(dá)與分布21-24
• 2.1 視網(wǎng)膜組織樣本的準(zhǔn)備21
• 2.2 免疫熒光技術(shù)對Neuroserpin進(jìn)行定位分析21-22
• 2.3 蛋白印記技術(shù)對Neuroserpin進(jìn)行定量分析22-24
• 結(jié)果24-26
• 1. 生理及病理情況下Neuroserpin在視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)及分布24-26
• 2. 不同的灌注壓及灌注時間,均可誘導(dǎo)neuroserpin的表達(dá)26
• 小結(jié)26-27
• 第二部分 Neuroserpin玻璃體腔注射對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護(hù)27-40
• 目的27
• 材料27-29
• 1. 實驗動物27
• 2. 主要試劑27
• 3. 主要設(shè)備和儀器27-28
• 4. 藥物和溶液配制28-29
• 方法29-33
• 1. 玻璃體腔注射29
• 1.1 注射前準(zhǔn)備29
• 1.2 玻璃體腔給藥29
• 2. 視網(wǎng)膜缺血再灌注模型制備29
• 3. 暗適應(yīng)ERG的測量29-30
• 3.1 視網(wǎng)膜ERG記錄時間點29
• 3.2 測量前準(zhǔn)備29-30
• 3.3 ERG記錄30
• 4. 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)元凋亡的檢測30-31
• 4.1 視網(wǎng)膜樣本收集30
• 4.3 準(zhǔn)備冰凍切片30
• 4.4 TUNEL試劑盒進(jìn)行凋亡染色30-31
• 4.5 計數(shù)方法31
• 5. 視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后caspase-3、cleaved caspase-3、PARP、cleavedPRAP、caspase-9、cleaved caspase-9、caspase-8、cleaved caspase-8蛋白表達(dá)水平的分析(免疫印跡western blot)31-33
• 5.1 視網(wǎng)膜蛋白樣本的準(zhǔn)備31
• 5.2 配制SDS-PAGE濃縮膠與分離膠31
• 5.3 上樣31
• 5.4 SDS-PAGE電泳31-32
• 5.5 轉(zhuǎn)膜32
• 5.6 蛋白質(zhì)顯像32
• 5.7 免疫檢測32
• 5.8 化學(xué)發(fā)光檢測32-33
• 5.9 結(jié)果分析33
• 6. 統(tǒng)計分析33
• 結(jié)果33-39
• 1. 在野生型C57小鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中,Neuroserpin玻璃體預(yù)干預(yù)促進(jìn)視網(wǎng)膜功能的恢復(fù)33-35
• 2. Neuroserpin玻璃體給藥保護(hù)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡35-37
• 3. Neuroserpin抑制caspase-3和PARP的激活來發(fā)揮抗凋亡功能37-38
• 4. Neuroserpin通過抑制caspase-9通路來抑制caspase-3的激活38-39
• 小結(jié)39-40
• 第三部分 Neuroserpin對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷是否依賴于對組織型纖溶酶原激活劑的抑制活性40-46
• 目的40
• 材料40
• 1. 實驗動物40
• 2. 主要試劑：同第二部分主要試劑40
• 3. 主要設(shè)備和儀器：同第二部分主要試劑40
• 方法40-41
• 1. tPA基因敲除鼠(tPA~(-/-))驗證40
• 1.1 取視網(wǎng)膜40
• 1.2 采用蛋白印記技術(shù)驗證tPA~(-/-)鼠視網(wǎng)膜組織中不表達(dá)tPA蛋白40
• 2. 玻璃體腔注射40
• 3. 視網(wǎng)膜缺血再灌注模型制備40-41
• 4. 暗適應(yīng)ERG的測量41
• 5. tPA基因敲除(tPA~(-/-))鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后caspase-3、cleavedcaspase-3、PARP、cleaved PRAP蛋白表達(dá)水平的分析(免疫印跡western blot)：41
• 6. 統(tǒng)計學(xué)分析41
• 結(jié)果41-45
• 1. 在tPA基因敲除鼠(tPA~(-/-))中Neuroserpin玻璃體給藥促進(jìn)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷功能的恢復(fù)41-43
• 2. 在tPA基因敲除鼠(tPA~(-/-))中,Neuroserpin玻璃體給藥保護(hù)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡43-45
• 3. 在tPA基因敲除鼠(tPA~(-/-)),Neuroserpin抑制caspase-3和PARP的激活來發(fā)揮抗凋亡功能45
• 小結(jié)45-46
• 討論46-48
• 全文總結(jié)及展望48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述52-62
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 致謝62-63

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李艷菊;譚淑慧;夏春鳳;張鏞;杜怡峰;馬國詔;;NF-κB對Aβ_(1-42)誘導(dǎo)神經(jīng)元K_(ATP)亞基Kir6.2/SUR1表達(dá)的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年10期

2 王U喅，

本文編號：808160