本文關鍵詞：缺氧調控端粒酶活性及抑制鼻咽癌細胞增殖實驗研究

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【摘要】：目的探討缺氧及siRNA沉默缺氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)后對鼻咽癌細胞中端粒酶催化亞單位(telomerase catalytic subunit,hTERT)、細胞周期和化療耐藥的影響。方法采用三氣培養(yǎng)箱對鼻咽癌細胞5-8F和CNE2進行缺氧處理(1%O2),蛋白質印跡法檢測不同乏氧時相(0~72h)HIF-1α和hTERT蛋白的表達。將HIF-1α基因特異性siRNA分別轉染鼻咽癌細胞株5-8F和CNE2,篩選出沉默效率最高的siRNA,實驗分為未處理組(常氧)、未處理組(缺氧)、Negative-siRNA(缺氧)和HIF-1α-siRNA(缺氧),熒光定量PCR及蛋白質印跡檢測瞬時轉染后hTERT及HIF-1α的表達。流式細胞術(flow cytometry,FCM)分析缺氧或沉默HIF-1α后對細胞周期的影響。MTT法檢測缺氧或沉默HIF-1α后,鼻咽癌細胞對順鉑(DDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)的化療敏感性。結果缺氧處理0~72h后鼻咽癌5-8F細胞HIF-1α(F=37.147,P0.001)和hTERT(F=70.069,P0.001)蛋白的表達上調,差異有統(tǒng)計學意義。HIF-1α-siRNA對5-8F細胞瞬時轉染率98%。HIF-1α-siRNA組hTERT mRNA表達量為0.37±0.05,顯著低于未處理組(缺氧)的1.00±0.00和Negative-siRNA(缺氧)的0.95±0.01,F=360.339,P0.001;hTERT蛋白表達量為(0.27±0.05),顯著低于未處理組(缺氧)0.54±0.00和Negative-siRNA組(缺氧)0.53±0.01,F=24.010,P0.001。未處理組(缺氧)G0/G1期細胞比例明顯增加(45.63±2.01)%,顯著高于未處理組(常氧)的(26.75±1.28)%,P0.001。5-8F細胞未處理組(常氧)對5-FU的IC50分別為(17.30±3.31)μg/mL,未處理組(缺氧)為(32.04±12.75)μg/mL,Negative-siRNA組為(33.90±0.87)μg/mL,HIF-1α-siRNA組為(13.72±2.36)μg/mL,F=3.704,P0.001。5-8F細胞缺氧組對DDP的化療敏感性也降低,沉默HIF-1α后,5-8F細胞對DDP的化療敏感性明顯提高。除細胞周期外,CNE2與5-8F的結果均一致。結論缺氧促使鼻咽癌細胞發(fā)生G1/S阻滯及化療耐藥,可能與上調hTERT表達,進而上調端粒酶活性有關;沉默HIF-1α顯著逆轉缺氧誘導的腫瘤耐藥并下調端粒酶活性。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科;新疆醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;
【關鍵詞】： 鼻咽腫瘤 缺氧誘導因子 端粒酶 RNA干擾 逆轉耐藥
【基金】：廣東省科技計劃(2010B031200009)
【分類號】：R739.63
【正文快照】： 中華腫瘤防治雜志,2015,22(7):507-513Chin J Cancer Prev Treat,2015,22(7):507-513缺氧對鼻咽癌在內(nèi)的惡性實體腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移及化學耐藥顯著相關[1]。但缺氧導致腫瘤高度惡性轉化的機制到目前為止尚不清楚。目前研究認為,缺氧誘導因子-1(hypoxia inducible factor-

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本文編號：765433