本文關(guān)鍵詞：EB病毒潛伏膜蛋白LMP2A對人鼻咽癌細胞增殖與遷移特性的影響

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【摘要】：目的 :制備重組慢病毒載體p LMP2A,并檢測其在人鼻咽癌細胞CNE1的表達情況及潛伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)對人鼻咽癌細胞CNE1增殖、遷移、侵襲的影響。方法 :利用DNA重組技術(shù)將EB病毒編碼的LMP2A基因克隆到慢病毒表達載體plv-GFP中,通過酶切、測序驗證,將重組慢病毒載體p LMP2A與包裝質(zhì)粒pdelta-8.91、p VSVG共轉(zhuǎn)染人胚腎上皮細胞株293T,包裝重組慢病毒LV-LMP2A,并感染人鼻咽癌細胞CNE1,經(jīng)單克隆篩選后,用RT-PCR、免疫熒光和Western blot檢測LMP2A在人鼻咽癌細胞CNE1的表達,CCK8法檢測LMP2A對人鼻咽癌細胞CNE1增殖的影響,劃痕實驗、Transwell侵襲實驗檢測LMP2A對人鼻咽癌細胞CNE1遷移和侵襲的影響。結(jié)果:酶切及測序結(jié)果表明,成功制備了重組慢病毒載體p LMP2A;RT-PCR、Western blot、免疫熒光結(jié)果顯示篩選出的細胞克隆能高表達EBV-LMP2A,CCK8結(jié)果顯示LMP2A能促進人鼻咽癌細胞CNE1增殖,劃痕實驗結(jié)果顯示LMP2A能促進人鼻咽癌細胞CNE1遷移,Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示LMP2A能提高人鼻咽癌細胞CNE1侵襲能力。結(jié)論:成功制備了慢病毒載體p LMP2A,包裝的慢病毒能夠成功感染人鼻咽癌細胞系CNE1,使LMP2A基因得以高表達,并發(fā)現(xiàn)LMP2A能夠促進人鼻咽癌細胞株CNE1增殖、遷移、侵襲,為進一步探討EB病毒在鼻咽癌中的發(fā)病機制及基因治療奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院腫瘤科;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學研究所;南京醫(yī)科大學衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： EB病毒 潛伏膜蛋白A 鼻咽癌 慢病毒載體
【基金】：江蘇省臨床醫(yī)學科技專項(BL2013038)
【分類號】：R739.63
【正文快照】： 南京醫(yī)科大學學報EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)屬人類γ亞科皰疹病毒,是傳染性單核細胞增多癥(infectiousmononucleosis,IM)的病原體,與鼻咽癌(nasopharyn-geal carcinoma,NPC)、Burkitts淋巴瘤(burkitt lym-phoma,BL)、胃癌(gastric carcinoma,GC)等[1]多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)

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本文編號：747890