本文關(guān)鍵詞：血必凈對(duì)OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠的治療作用及其對(duì)HO-1的影響

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【摘要】：目的：變應(yīng)性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)是易感個(gè)體接觸變應(yīng)原后，主要由免疫球蛋白E介導(dǎo)的以發(fā)作性噴嚏、流涕和鼻塞為主要癥狀的鼻黏膜變態(tài)反應(yīng)性炎癥。表現(xiàn)為大量表達(dá)Th2細(xì)胞因子的Th細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)引發(fā)炎性反應(yīng)過(guò)程[1]。近50年來(lái)變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢(shì)，作為難治性疾病，它已成為一個(gè)全球性健康問(wèn)題。由于疾病發(fā)生的原因復(fù)雜且參與因素眾多，因此以FVB小鼠為研究對(duì)象建立變應(yīng)性鼻炎小鼠模型，以小鼠鼻黏膜下毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞為切入點(diǎn)研究血必凈治療前后鼻黏膜和毛細(xì)血管內(nèi)皮中HO-1的表達(dá)情況，探討血必凈對(duì)OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠的治療作用及其對(duì)HO-1的影響，為變應(yīng)性鼻炎的治療提供一個(gè)新的思路。 方法：FVB系SPF級(jí)小鼠40只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、OVA模型組、OVA+地塞米松干預(yù)組和OVA+血必凈干預(yù)組，每組10只。OVA模型組:卵清蛋白(OVA)1.5ml加入氫氧化鋁1.5ml，，制成10％OVA混懸液。于實(shí)驗(yàn)第l~9天，經(jīng)腹腔注射OVA混懸液250μl(OVA25μg)，基礎(chǔ)致敏完成后于實(shí)驗(yàn)第10~17天行局部激發(fā)。OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組模型建立：實(shí)驗(yàn)第l~9天，經(jīng)腹腔注射OVA混懸液250μl(OVA25μg)，基礎(chǔ)致敏完成后，實(shí)驗(yàn)10~17天地塞米松(10mg/kg/d0或血必凈(0.41ml/kg/d)腹腔注射預(yù)處理，30min后局部激發(fā)，建立模型。動(dòng)物模型進(jìn)行行為學(xué)觀察。HE染色觀察鼻部形態(tài)學(xué)改變。鼻腔灌洗液離心沉淀涂片行炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)外周血中OVA特異性IgE和鼻腔灌洗液IL-4、IL-5、IL-13、INF-γ水平。免疫組織化學(xué)染色觀察鼻黏膜HO-1的表達(dá)情況。采用免疫磁珠技術(shù)對(duì)正常小鼠分離鼻黏膜下毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)于20%新生小牛血清的DMEM培養(yǎng)基，依照實(shí)驗(yàn)建立正常對(duì)照組、炎癥模型組、血必凈干預(yù)組、TNF+地塞米松干預(yù)組、TNF+血必凈干預(yù)組、Znpp+TNF+血必凈干預(yù)組。Western blot、Real-timePCR技術(shù)檢測(cè)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1、ICAM-1表達(dá)情況；激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS的表達(dá)。所有資料均運(yùn)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用方差分析和相關(guān)分析處理數(shù)據(jù)，以α=0.05作為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：OVA模型組中10只動(dòng)物均建模成功，變應(yīng)性鼻炎典型癥狀明顯；OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組相比正常對(duì)照組癥狀無(wú)明顯變化。 1HE染色形態(tài)學(xué)觀察：正常對(duì)照組鼻黏膜無(wú)明顯炎癥改變；OVA模型組鼻黏膜則有不同程度的水腫，上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，杯狀細(xì)胞增生，黏膜下嗜酸粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)；而OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組上述癥狀明顯減輕。血清OVA特異性IgE水平ELISA檢測(cè)：OVA模型組中的OVA特異性IgE水平相比正常對(duì)照組明顯升高，而OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組相比OVA模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；鼻腔灌洗液離心沉淀涂片行炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)：OVA模型組中的嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞相比正常對(duì)照組明顯升高，而OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組相比OVA模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。證明血必凈對(duì)OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠有治療作用。 2鼻腔灌洗液IL-4、IL-5、IL-13、INF-γ水平ELISA檢測(cè)：OVA模型組中的IL-4、IL-5、IL-13水平相比正常對(duì)照組明顯升高，而OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組相比OVA模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；相反OVA模型組中的INF-γ相比正常對(duì)照組明顯降低，而OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組相比OVA模型組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說(shuō)明血必凈通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡，從而治療OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠。 3ROS與CAT、GSH、SOD的檢測(cè)：ROS激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示：ROS在TNF+地塞米松干預(yù)組、TNF+血必凈干預(yù)組相比炎癥模型組在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。SOD、CAT、GSH在TNF+血必凈干預(yù)組相比炎癥模型組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說(shuō)明血必凈通過(guò)逆轉(zhuǎn)氧化/抗氧化失衡，從而治療OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠。 4Western blot結(jié)果顯示：相比炎癥模型組，TNF+血必凈干預(yù)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞后，ICAM-1表達(dá)減少。單核細(xì)胞粘附：TNF+地塞米松干預(yù)組、TNF+血必凈干預(yù)組相比炎癥模型組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附單核細(xì)胞明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說(shuō)明血必凈通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡、逆轉(zhuǎn)氧化/抗氧化失衡，抑制鼻黏膜下毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞活化，從而治療OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠。 5免疫組化結(jié)果顯示：OVA模型組鼠鼻黏膜中HO-1主要位于黏膜上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞的胞漿，少見(jiàn)于胞核，間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和浸潤(rùn)的炎細(xì)胞胞漿中也有陽(yáng)性著色表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒。OVA模型組、OVA+地塞米松干預(yù)組、OVA+血必凈干預(yù)組與正常對(duì)照組相比，HO-1表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HO活力檢測(cè)：血必凈干預(yù)組、TNF+血必凈干預(yù)組相比炎癥模型組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示：血必凈干預(yù)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞后，HO-1表達(dá)呈現(xiàn)劑量依賴性和時(shí)間依賴性；TNF-α刺激毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞后，HO-1表達(dá)呈現(xiàn)先升高再降低(4h表達(dá)最強(qiáng))；而TNF+血必凈干預(yù)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞后，HO-1長(zhǎng)時(shí)間高表達(dá)。相比炎癥模型組，TNF+血必凈干預(yù)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞后，ICAM-1表達(dá)減少。Znpp是HO-1的阻斷劑，Znpp阻斷毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1后，ICAM-1表達(dá)仍明顯增加。SOD、CAT、GSH在Znpp+TNF+血必凈干預(yù)組相比TNF+血必凈干預(yù)組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說(shuō)明血必凈通過(guò)誘導(dǎo)鼻黏膜下毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1的表達(dá)，其表達(dá)呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性，調(diào)節(jié)Th1/Th2、氧化/抗氧化失衡，治療OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠。 結(jié)論： 1血必凈對(duì)OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠的有治療作用。 2血必凈通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2、氧化/抗氧化失衡，抑制鼻黏膜下毛細(xì)血管內(nèi)皮活化，從而治療OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠。 3血必凈通過(guò)誘導(dǎo)鼻黏膜下毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1的表達(dá)，其表達(dá)呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性，調(diào)節(jié)Th1/Th2、氧化/抗氧化失衡，治療OVA誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎小鼠。
【關(guān)鍵詞】：變應(yīng)性鼻炎 HO-1 毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 細(xì)胞間粘附分子-1 活性氧
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R765.21
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-21
• 附圖21-35
• 附表35-36
• 討論36-40
• 結(jié)論40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述 ROS 在變應(yīng)性炎癥的研究進(jìn)展43-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 致謝57-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 徐方平,羅健東;活性氧與心肌細(xì)胞凋亡[J];華北國(guó)防醫(yī)藥;2003年02期

2 孫軍平;汪建新;郭麗娜;;內(nèi)毒素致兔急性肺損傷及血必凈保護(hù)作用[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2009年01期

3 余少卿,章如新,劉國(guó)鈞,燕志強(qiáng),溫武;血紅素氧合酶1在變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型的鼻黏膜中的表達(dá)[J];臨床耳鼻咽喉科雜志;2005年11期

4 蘇興利;張鴻;霍健;王爽;郭玉芳;王湘;王多寧;楊穎;;NADPH氧化酶源性ROS在乳鼠心肌細(xì)胞肥大中的作用[J];西部醫(yī)學(xué);2012年03期

5 任德成,杜冠華;活性氧對(duì)蛋白激酶和基因表達(dá)調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2003年05期

6 馬俊清;路偉;黃楊;余厚友;張永和;宋祖軍;陳軍;;血必凈注射液對(duì)百草枯刺激的大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)急救醫(yī)學(xué);2008年09期

7 雪琳;SIRS和MODS防治新對(duì)策的實(shí)驗(yàn)研究——血必凈的藥效學(xué)觀察[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);1997年12期

8 張畔,曹書華,崔克亮,王今達(dá);血必凈對(duì)多臟器功能障礙綜合征單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)影響的研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

9 蘇啟生;蘇麗芬;;血必凈注射液治療哮喘持續(xù)狀態(tài)52例[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2011年09期

本文編號(hào)：727745