本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外誘導(dǎo)向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的研究

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【摘要】：目的：建立SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)體外培養(yǎng)體系,誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞,篩選較好的體外誘導(dǎo)方法,為下一步內(nèi)耳移植實(shí)驗(yàn)提供前期研究基礎(chǔ)。 方法：LBMSCs培養(yǎng)：主要采用全骨髓直接貼壁法培養(yǎng)BMSCs并傳代,取P3代行流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSCs表面標(biāo)志CD29, CD90及造血細(xì)胞表面抗原CD45的表達(dá)。2.取P4代BMSCs,由堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)預(yù)誘導(dǎo)24h后,分別加入：A組誘導(dǎo)劑：神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素3(NT-3),維甲酸(RA)；B組誘導(dǎo)劑：p-硫基乙醇(BME)。誘導(dǎo)lh,5h,24h,7d,14d,21d后,采用細(xì)胞免疫熒光方法鑒定,檢測(cè)成熟神經(jīng)元標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達(dá)情況,觀察兩組是否有染色陽(yáng)性的神經(jīng)元樣細(xì)胞及比較陽(yáng)性率的高低。 結(jié)果：1.全骨髓貼壁篩選法簡(jiǎn)便,所獲得的細(xì)胞數(shù)量多,增殖分化快。2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSCs表達(dá)CD90、CD29;不表達(dá)CD45,結(jié)合細(xì)胞形態(tài)分析,符合BMSCs的特征。3.細(xì)胞免疫熒光結(jié)果示NSE陽(yáng)性表達(dá),A組誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的陽(yáng)性率明顯高于B組。 結(jié)論：1.全骨髓貼壁篩選法分離培養(yǎng)的BMSCs所獲得的細(xì)胞數(shù)量多,增殖分化快,純度高。2.采取分步誘導(dǎo)和聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs,由bFGF預(yù)誘導(dǎo)24h后,換用NT-3+RA誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞NSE陽(yáng)性率明顯高于BME誘導(dǎo),是一種比較好的誘導(dǎo)方案。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo)方法 神經(jīng)元樣細(xì)胞 內(nèi)耳移植
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目錄7-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-10
• 1 前言10-12
• 2 BMSCs的分離培養(yǎng)及鑒定12-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑12-13
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備12
• 2.1.3 主要試劑12-13
• 2.1.4. 基本試劑的配制13
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)器械13
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法13-16
• 2.2.1 技術(shù)路線13-14
• 2.2.2 BMSCs的分離和培養(yǎng)14-15
• 2.2.3 BMSCs表面標(biāo)志物的鑒定15-16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-20
• 2.3.1 不同培養(yǎng)時(shí)間BMSCs形態(tài)變化16-19
• 2.3.2 BMSCs的流式細(xì)胞儀結(jié)果19-20
• 2.4 討論20-23
• 2.4.1 鼠齡的選擇20-21
• 2.4.2 BMSCs的取材分離及純化21
• 2.4.3 BMSCs的培養(yǎng)21-22
• 2.4.5 存在的問(wèn)題22-23
• 3 BMSCs的體外誘導(dǎo)分化23-34
• 3.1 材料與方法23-24
• 3.1.1 主要儀器設(shè)備23
• 3.1.2 主要試劑及耗材23-24
• 3.1.3 主要試劑及培養(yǎng)液的配置24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 3.2.1 技術(shù)路線24
• 3.2.2 BMSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)樣細(xì)胞24-25
• 3.2.3 細(xì)胞免疫熒光鑒定25
• 3.2.4 BMSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)樣細(xì)胞分化率的比較25
• 3.3 結(jié)果25-29
• 3.3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化25-27
• 3.3.2 細(xì)胞免疫熒光鑒定結(jié)果27-29
• 3.3.3 BMSCs誘導(dǎo)后NSE陽(yáng)性表達(dá)率29
• 3.4 討論29-34
• 3.4.1 BMSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)樣細(xì)胞的誘導(dǎo)方法29-30
• 3.4.2 BMSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化機(jī)制30-32
• 3.4.3 BMSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)元細(xì)胞樣細(xì)胞的檢測(cè)32-33
• 3.4.4 BMSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)樣細(xì)胞的應(yīng)用前景33-34
• 4 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-43
• 綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果52-53
• 致謝53-54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉謙虛;BDNF基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化及對(duì)耳蝸螺旋神經(jīng)元保護(hù)作用初步研究[D];中南大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：722389