本文關(guān)鍵詞：重組干擾素誘導(dǎo)蛋白-10對人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究

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【摘要】：背景與目的 糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy, DR）、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞（central retinalvein occlusion, CRVO）、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變（retinopathy of prematurity, ROP）等多種視網(wǎng)膜相關(guān)疾病與新生血管的發(fā)生有密切聯(lián)系。當(dāng)這些新生血管發(fā)生滲漏、出血、纖維增生而造成視網(wǎng)膜水腫、視網(wǎng)膜玻璃體出血或牽引視網(wǎng)膜脫離時(shí)，則可以導(dǎo)致視力下降或喪失。血管新生是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過程，由已形成的血管內(nèi)皮細(xì)胞沖破血管壁的基底膜，遷移、增殖和連接組成新的血管。一些研究結(jié)果表明，重組干擾素誘導(dǎo)蛋白-10（interferon-inducible protein-10, IP-10）能夠與CXC趨化因子受體3（chemokinereceptor3, CXCR3）結(jié)合發(fā)揮抗血管作用，并且人的多種血管內(nèi)皮細(xì)胞均不同程度地表達(dá)CXCR3。IP-10抑制視網(wǎng)膜新生血管生成作用已有報(bào)道，但對內(nèi)皮細(xì)胞作用的具體機(jī)制目前尚不清楚。本研究旨在通過檢測IP-10對人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞（human retinal microvascular endothelial cells, HREC）增殖、遷移和管腔形成能力的影響，并以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）作為參照，探討其抑制視網(wǎng)膜新生血管生成的途徑及特異性作用，以期對視網(wǎng)膜新生血管的研究提供新的理論依據(jù)及治療靶點(diǎn)。 材料與方法 1、常規(guī)消化HREC和HUVEC，分別收集約1×10~6個(gè)細(xì)胞，以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）方法檢測兩種細(xì)胞CXCR3mRNA的表達(dá)情況。 2、分別收集HREC和HUVEC，調(diào)整細(xì)胞濃度至5000個(gè)/100μl，以每孔100μl接種于96孔板，以不同濃度IP-10（0，10，100，1000ng/ml）作用于孔內(nèi)細(xì)胞24h后，每孔加入CCK810μl，37℃，5%CO2孵育箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h后，酶聯(lián)檢測儀450nm波長處測定吸光度（OD值）。 3、HREC和HUVEC兩種細(xì)胞貼壁生長后，移液槍尖垂直培養(yǎng)板劃痕，及時(shí)拍照。設(shè)置3個(gè)IP-10濃度組，干預(yù)24h后再次拍照，軟件測量計(jì)算細(xì)胞加藥前后遷移距離。 4、根據(jù)IP-10濃度分成0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml組及1000ng/ml4個(gè)組，Matrigel體外三維成型法檢測IP-10對HREC和HUVEC管腔形成能力的影響。 結(jié)果 1、RT-PCR檢測結(jié)果顯示，HREC和HUVEC兩個(gè)細(xì)胞株均在基因水平表達(dá)IP-10受體CXCR3。 2、CCK-8增殖分析法結(jié)果顯示IP-10抑制HREC增殖，在0~1000ng/ml范圍隨濃度增加增殖抑制率有上升趨勢（F=6.202，P0.05），各濃度對HUVEC的增殖均無明顯影響（F=1.183，P0.05）。 3、細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)中IP-10在劑量10ng/ml和100ng/ml干預(yù)時(shí)，HREC和HUVEC遷移距離均小于對照組的遷移距離，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=25.373，P0.05；F=23.858，P0.05）。 4、Matrigel體外三維成型實(shí)驗(yàn)中，10、100ng/ml IP-10對HREC完整管腔形成數(shù)量無明顯影響，1000ng/ml IP-10可使HREC完整管腔形成數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.359，P0.05）。 結(jié)論 1、HREC和HUVEC二種血管內(nèi)皮細(xì)胞均在基因水平表達(dá)CXCR3。 2、干擾素誘導(dǎo)蛋白-10對HREC的增殖、遷移及管腔形成均有抑制作用，，對HUVEC的遷移有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：干擾素誘導(dǎo)蛋白-10 人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 新生血管
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 參考文獻(xiàn)11-12
• 第一部分 人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 CXCR3 的表達(dá)12-25
• 材料與儀器13-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-20
• 結(jié)果20
• 討論20-22
• 結(jié)論22
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 第二部分 IP-10 對人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的探討25-36
• 材料與儀器26-27
• 實(shí)驗(yàn)方法27-28
• 結(jié)果28-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 附圖36-37
• 全文總結(jié)37-38
• 綜述38-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 英文縮略詞表47-48
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文48-49
• 本研究所獲的基金資助49-50
• 致謝50-51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號(hào)：692864