本文關(guān)鍵詞：FLRT2對(duì)鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響

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【摘要】：[目的]建立FLRT2(Fibronectin Leucine Rich Transmembrane-2)敲減后SD乳鼠鼻中隔軟骨細(xì)胞(nasal septal chondrocyte,NSC)模型,觀察FLRT2敲減前后鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的差異,為探討FLRT2對(duì)鼻中隔軟骨的形成過程和在面中分生長(zhǎng)發(fā)育中的作用機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。 [方法]用機(jī)械分離和酶聯(lián)消化法將出生1-3天SD乳鼠的鼻中隔軟骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)生長(zhǎng)狀態(tài)良好的軟骨細(xì)胞進(jìn)行FLRT2-shRNAi慢病毒感染,采用噻唑藍(lán)(methyl hiazolyl tetraxolium, MTT)比色法繪制鼻中隔軟骨細(xì)胞FLRT2-shRNAi慢病毒感染后的生長(zhǎng)曲線；劃痕實(shí)驗(yàn)觀察鼻中隔軟骨細(xì)胞劃痕4小時(shí)、8小時(shí)后細(xì)胞遷移能力的變化；實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測(cè)FLRT2敲減后鼻中隔軟骨細(xì)胞N-鈣粘蛋白(N-Cadherin)Ⅱ型膠原(type Ⅱ collagen, Col Ⅱ)、聚集蛋白多糖(aggrecan, AGG)、Sox-9mRNA表達(dá)的變化。 [結(jié)果]成功建立了FLRT2-shRNAi慢病毒感染后的鼻中隔軟骨細(xì)胞模型。MTT檢測(cè)法顯示,感染FLRT2-shRNAi慢病毒的鼻中隔軟骨細(xì)胞表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組總是最低,說明FLRT2敲減以后,細(xì)胞的增殖受到了抑制,且在第四天至第六天差異明顯；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,FLRT2-shRNAi慢病毒感染后的鼻中隔軟骨細(xì)胞的遷移率較NC-shRNAi慢病毒感染后的鼻中隔軟骨細(xì)胞(陰性對(duì)照組)的遷移率低,說明FLRT2可促進(jìn)鼻中隔軟骨細(xì)胞遷移。RT-PCR顯示,FLRT2-shRNAi感染的鼻中隔軟骨細(xì)胞中N-cadherin mRNA的表達(dá)較陰性對(duì)照組明顯增加；ColⅡ、AGG、Sox-9mRNA在FLRT2-shRNAi感染組的鼻中隔軟骨細(xì)胞中的表達(dá)都有所降低,說明FLRT2可抑制N-cadherin合成,促進(jìn)Col Ⅱ、AGG、Sox-9的合成。 [結(jié)論]1.成功建立SD乳鼠鼻中隔軟骨細(xì)胞FLRT2-shRNAi'慢病毒感染后的模型。2.MTT檢測(cè)以及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)說明FLRT2可促進(jìn)鼻中隔軟骨細(xì)胞的增殖和遷移。3.實(shí)時(shí)定量PCR顯示FLRT2可降低N-cadherin mRNA的表達(dá),抑制細(xì)胞粘附,并且促進(jìn)鼻中隔軟骨細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)ColⅡ、AGG及Sox-9生成增加,進(jìn)而調(diào)節(jié)軟骨形成。
【關(guān)鍵詞】：FLRT2 慢病毒感染 鼻中隔軟骨細(xì)胞 軟骨形成 生物學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R765.9
【目錄】：

• 英文縮寫詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-13
• 第一部分 SD乳鼠鼻中隔軟骨細(xì)胞FLRT2敲減模型的建立13-25
• 材料13-14
• 方法14-16
• 結(jié)果16-23
• 討論23-24
• 結(jié)論24-25
• 第二部分 FLRT2對(duì)鼻中隔軟骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)表達(dá)的探索25-33
• 材料25-26
• 方法26-27
• 結(jié)果27-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32-33
• 第三部分 FLRT2對(duì)鼻中隔軟骨形成相關(guān)基因的影響33-43
• 材料34
• 方法34-36
• 結(jié)果36-40
• 討論40-42
• 結(jié)論42-43
• 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 文獻(xiàn)綜述47-54
• 參考文獻(xiàn)53-54
• 發(fā)表文章54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：681032