本文關(guān)鍵詞：microRNA-183家族在噪聲性耳聾發(fā)生及發(fā)展中的表達(dá)及功能研究

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【摘要】：噪聲引起的慢性聽(tīng)力損失與耳蝸內(nèi)的機(jī)械損傷和代謝障礙密切相關(guān)。人們?nèi)绻掷m(xù)在有害的噪聲環(huán)境中工作或生活，由于噪聲長(zhǎng)時(shí)間的過(guò)度刺激很可能會(huì)導(dǎo)致耳蝸毛細(xì)胞壞死或者凋亡，耳蝸毛細(xì)胞內(nèi)的氧自由基活動(dòng)增強(qiáng)和能量代謝障礙被認(rèn)為是導(dǎo)致內(nèi)耳毛細(xì)胞壞死或者凋亡的主要原因。隨著噪聲性聾發(fā)病機(jī)制研究的深入，研究人員發(fā)現(xiàn)噪聲性耳聾是環(huán)境和基因兩個(gè)因素共同影響的。 miRNA在生物體發(fā)展過(guò)程中的作用已被廣泛的研究，許多高保守性的miRNA在特定的細(xì)胞、器官和生物過(guò)程（包括疾�。┲械淖饔靡驳玫搅顺浞值恼J(rèn)識(shí)。其中miR-183家族在內(nèi)耳中具有豐量的表達(dá)，并在內(nèi)耳發(fā)育中具有重要的調(diào)控作用，而且miR-183家族與聽(tīng)力損失也有密切的關(guān)系。因此，miR-183家族與聽(tīng)力損失之間相關(guān)性的研究將成為熱門(mén)。進(jìn)而探索在基因水平上的治療,特別是有關(guān)促使毛細(xì)胞再生領(lǐng)域及聽(tīng)力提高等方面。由此可見(jiàn)，miR-183家族在聽(tīng)力學(xué)領(lǐng)域有著不可估量的科學(xué)價(jià)值，同時(shí)也為人類(lèi)的聽(tīng)力開(kāi)辟一條新的光明之路。 本課題通過(guò)噪聲頻率為中心頻率2000～4000Hz的窄帶噪聲，給聲強(qiáng)度為100dB SPL,每天連續(xù)6小時(shí)，持續(xù)噪聲暴露3天來(lái)建立小鼠的噪聲性耳聾（noise-induced hearing loss,NIHL）的動(dòng)物模型，探討噪聲性耳聾對(duì)內(nèi)耳毛細(xì)胞（hair cell，HC）的破壞程度，及檢測(cè)噪聲性耳聾前后耳蝸內(nèi)miR-183家族成員的表達(dá)變化，為進(jìn)一步闡明噪聲性耳聾的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)，也為將來(lái)治療噪聲性耳聾提供一條新的思路。本文共分為三個(gè)部分。 第一部分噪聲性耳聾模型的建立 目的：建立噪聲性耳聾動(dòng)物模型，為研究噪聲性耳聾對(duì)內(nèi)耳毛細(xì)胞的破壞程度，及檢測(cè)噪聲性耳聾前后耳蝸內(nèi)miR-183家族成員的表達(dá)變化奠定基礎(chǔ)。 方法：50只小鼠隨機(jī)分為5組（1、7、14、28d組及對(duì)照組），每組10只。實(shí)驗(yàn)組給予中心頻率2000～4000Hz的窄帶噪聲，強(qiáng)度為100dB SPL,每天6小時(shí)，持續(xù)3天。對(duì)照組不接觸噪聲。在噪聲刺激前及噪聲刺激后1、7、14和28d后測(cè)ABR閾值。 結(jié)果：以能分辨出I或Ⅱ波波型的最低刺激強(qiáng)度來(lái)確定ABR閾值，并重復(fù)2次。噪聲暴露后1d、7d、14d、28d組ABR平均閾值分別為62.50±3.80dB、44.50±4.56dB、40.25±4.13dB、40.50±3.20dB。統(tǒng)計(jì)分析示，實(shí)驗(yàn)組噪聲刺激前后ABR閾值均有顯著性差異(P0.01)。噪聲刺激后，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組每組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）,1d與7d、14d、28d組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），7d與14d、28d組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），14d與28d組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論：此噪聲刺激可以引起小鼠聽(tīng)力的永久性閾移，證實(shí)基本成功地建立了噪聲性聽(tīng)力損害的動(dòng)物模型，為噪聲性耳聾發(fā)病機(jī)制的研究打下了基礎(chǔ)。 第二部分噪聲性耳聾內(nèi)耳毛細(xì)胞的研究 目的：檢測(cè)噪聲性耳聾后內(nèi)耳毛細(xì)胞的破壞情況，為判定噪聲通過(guò)損傷毛細(xì)胞來(lái)破壞聽(tīng)力提供依據(jù)。 方法：各組小鼠在麻醉后迅速斷頭處死，取其雙側(cè)聽(tīng)泡。用0.5%硝酸銀溶液染色，再取其耳蝸基底膜進(jìn)行鋪片，用純甘油封片，在倒置相差顯微鏡下觀察并攝片，觀察毛細(xì)胞破壞情況。 結(jié)果：正常對(duì)照組小鼠耳蝸第二回基底膜可見(jiàn)三排外毛細(xì)胞（紅箭頭）和一排內(nèi)毛細(xì)胞（藍(lán)箭頭）均排列整齊，同時(shí)染色缺失率極小。清晰可見(jiàn)其外纖毛簇呈倒“v”形，內(nèi)纖毛簇呈寬“u”形；1d組內(nèi)毛細(xì)胞排列比較整齊，外毛細(xì)胞排列稍顯混亂，且大小不一，但總體缺失仍較少；7d組內(nèi)毛細(xì)胞依然排列比較整齊，但外毛細(xì)胞可見(jiàn)少量缺失；14d組外毛細(xì)胞可見(jiàn)有明顯缺失，主要集中在第一、二排；28d組內(nèi)毛細(xì)胞排列較整齊，未見(jiàn)有缺失，外毛細(xì)胞見(jiàn)大量缺失。 結(jié)論：此程度噪聲可以引起內(nèi)耳毛細(xì)胞破壞，，同時(shí)毛細(xì)胞的受損可能是小鼠噪聲性耳聾的早期病理性改變，而且這個(gè)過(guò)程至少可以延續(xù)到28天。破壞主要在外毛細(xì)胞，且多集中在第一、二排。 第三部分miR-183家族在噪聲性耳聾中的表達(dá)及研究 目的：檢測(cè)噪聲性耳聾前后耳蝸內(nèi)miR-183家族成員的表達(dá)變化，來(lái)探討miR-183家族是否參與了強(qiáng)噪聲誘導(dǎo)耳蝸毛細(xì)胞破壞的調(diào)控機(jī)制。從而為進(jìn)一步闡明噪聲性耳聾的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法：采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)miR-183家族成員表達(dá)量的變化。采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果： qRT-PCR檢測(cè)顯示，噪聲刺激后1d和7d組三種基因(miR-183/96/182)的表達(dá)量較對(duì)照組均下降（P0.01），而1d與7d組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；14d組其表達(dá)量呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)（P0.01）；28d組較14d組表達(dá)量明顯回降（P0.01），但仍高于1d、7d組（P0.01）。 結(jié)論： MicroRNA183家族成員在噪聲刺激后的一段時(shí)間內(nèi)表達(dá)量存在顯著變化，可能作為特異性基因在噪聲性耳聾發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。
【關(guān)鍵詞】：MicroRNA183家族 噪聲性耳聾 毛細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R764.433
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-13
• 第1章 前言13-15
• 第2章 噪聲性耳聾動(dòng)物模型的建立15-19
• 2.1 材料與方法15-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備15
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.1.3 噪聲刺激15-16
• 2.1.4 聽(tīng)性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response,ABR)測(cè)試16
• 2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理16
• 2.2 結(jié)果16-17
• 2.3 討論17-19
• 第3章 噪聲性耳聾內(nèi)耳毛細(xì)胞的研究19-24
• 3.1 材料與方法19-20
• 3.1.1 主要儀器及試劑19
• 3.1.2 基底膜硝酸銀染色鋪片19-20
• 3.1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)20
• 3.2 結(jié)果20-21
• 3.3 討論21-22
• 3.4 附圖22-24
• 第4章 miR-183 家族在噪聲性耳聾中的表達(dá)與研究24-32
• 4.1 材料與方法24-27
• 4.1.1 主要儀器及試劑24
• 4.1.2 主要方法及步驟24-27
• 4.1.3 實(shí)時(shí)定量 PCR 結(jié)果分析27
• 4.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27
• 4.2 結(jié)果27-28
• 4.2.1 1％瓊脂糖凝膠電泳顯示總 RNA27
• 4.2.2 實(shí)時(shí)定量 PCR27-28
• 4.3 討論28-30
• 4.4 附圖30-32
• 第5章 結(jié)論與展望32-33
• 5.1 結(jié)論32
• 5.2 展望32-33
• 致謝33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果36-37
• 綜述37-43
• 參考文獻(xiàn)42-43

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本文編號(hào)：664409