本文關(guān)鍵詞：慢性錳中毒誘導(dǎo)大鼠聽覺損傷的研究

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【摘要】：第一部分：慢性錳中毒對大鼠聽力及耳蝸細(xì)胞形態(tài)的影響 目的：通過建立大鼠慢性錳中毒模型，研究錳中毒對大鼠聽力及耳蝸毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以及線粒體融合蛋白2（mitochdrial fussion protein2，Mfn2）的表達(dá)變化的影響。 方法:隨機(jī)選取60只斷乳21天的SD大鼠,隨機(jī)分為染毒組和對照組，染毒組（30只）給予氯化錳水溶液(MnCl2·4H2O100mg/kg/d)，連續(xù)灌胃12w，對照組（30只）給予去離子水。分別于染毒4w、8w和12w檢測大鼠血錳濃度，于12w行聽性腦干反應(yīng)（auditory brainstem response，ABR）和畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(distortion productotoacoustic emissions，， DPOAE)檢測，基底膜鋪片鬼筆環(huán)肽－異硫氰酸熒光素（Phalloidin－FITC）染色觀察毛細(xì)胞形態(tài)及計(jì)數(shù)，HE染色觀察螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)及計(jì)數(shù)，通過透射電鏡（transmission election microscopy，TEM）觀察毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化，利用Western blot技術(shù)檢測Mfn2在耳蝸基底膜和螺旋神經(jīng)元中的表達(dá)變化。 結(jié)果：①大鼠染毒后，其血錳濃度隨時間逐漸增高，與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。②染毒12w大鼠4、8、16、24、32kHzABR反應(yīng)閾明顯增高(P0.05),其中高頻閾值提高顯著,DPOAE幅值降低。③基底膜鋪片F(xiàn)ITC染色示外毛細(xì)胞缺失，其中以底回缺失明顯；螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞HE染色示染毒組細(xì)胞數(shù)量減少；透射電鏡下，可見染毒組毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體嵴斷裂或消失，呈空泡樣變；④Westernblot結(jié)果示，染毒組基底膜和螺旋神經(jīng)元中Mfn2的表達(dá)明顯高于正常對照組。 結(jié)論：慢性錳中毒可以引起大鼠耳蝸毛細(xì)胞缺失和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少，進(jìn)而導(dǎo)致大鼠聽力損傷；耳蝸基底膜和螺旋神經(jīng)元中Mfn2表達(dá)增高，其作用機(jī)制還有待今后進(jìn)一步的研究。 第二部分:錳誘導(dǎo)體外螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（SGNs）凋亡的研究 目的：通過建立錳誘導(dǎo)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷體外模型，觀察錳中毒對螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（spiral ganglion cells,SGNs）形態(tài)的影響以及錳誘導(dǎo)SGNs凋亡過程中Bax蛋白的定位。 方法:采用原代分離培養(yǎng)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，分為染毒組和正常對照組，染毒組的暴露時間分別為6h、12h和24h，給藥濃度為5mM氯化錳水溶液(MnCl2·4H2O），在倒置顯微鏡下觀察螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)；利用β-tublin和Tunel試劑盒分別進(jìn)行SGNs鑒定和細(xì)胞凋亡檢測；采用Mitotraker Green FM熒光探針標(biāo)記活體SGNs線粒體，通過免疫熒光染色觀察Bax的轉(zhuǎn)位現(xiàn)象；在透射電鏡下觀察SGNs及其線粒體的超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：①倒置顯微鏡下錳暴露6h：細(xì)胞胞間隙增大，細(xì)胞發(fā)生皺縮，軸突變短；錳暴露12h、24h：細(xì)胞胞間隙進(jìn)一步增大，突觸變短甚至消失，核固縮；②β-tublin和Tunel免疫熒光染色結(jié)果示：錳暴露12h和24h檢測到凋亡細(xì)胞；③MitotrakerGreenFM和Bax免疫熒光染色結(jié)果示錳暴露6h： Bax在線粒體周圍云集；錳暴露12h和24h： Bax從胞漿轉(zhuǎn)位到線粒體；④透射電鏡下，錳暴露6h：細(xì)胞胞胞核內(nèi)異染色質(zhì)增多，線粒體發(fā)生空泡樣變；錳暴露12h和24h：觀察到凋亡細(xì)胞。 結(jié)論：體外錳可以導(dǎo)致螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡并伴有Bax的轉(zhuǎn)位，線粒體發(fā)生病理性改變。
【關(guān)鍵詞】：錳 錳中毒 毛細(xì)胞 螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 聽力下降 Mfn2 錳 錳中毒 螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 凋亡 Bax
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114;R764
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 文獻(xiàn)回顧12-22
• 1 錳的生理功能及吸收代謝特點(diǎn)12-13
• 2 錳的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)運(yùn)13-14
• 3 錳的神經(jīng)毒性14-18
• 4 Mfn2 與細(xì)胞凋亡18-19
• 5 錳對聽覺系統(tǒng)的影響19-22
• 第一部分 慢性錳中毒對大鼠聽力及耳蝸細(xì)胞形態(tài)的影響22-39
• 1 材料22-24
• 2 方法24-28
• 3 結(jié)果28-36
• 4 討論36-39
• 第二部分 錳誘導(dǎo)體外螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（SGNs）凋亡的研究39-51
• 1 材料39-41
• 2 方法41-43
• 3 結(jié)果43-48
• 4 討論48-51
• 小結(jié)51-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 個人簡歷和研究成果61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 孫明霞;閆永建;;錳的神經(jīng)毒性研究進(jìn)展[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2010年02期

2 張芳林;徐兆發(fā);高鍵;徐斌;鄧宇;賈克;;錳對大鼠腦線粒體能量代謝的影響[J];中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2007年06期

3 許輝杰,黃魏寧;順鉑作用下沙鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元和Corti器細(xì)胞的凋亡[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2003年02期

本文編號：571199