本文關(guān)鍵詞：循環(huán)性間歇性低氧對大鼠頸動(dòng)脈體內(nèi)NO抑制作用的研究

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【摘要】：在阻塞性睡眠呼吸暫停（obstructive sleep apnea, OSA）病人中，患有全身性高血壓的比例很高。但OSA引起動(dòng)脈壓升高的機(jī)制仍未完全明確。有研究顯示，OSA病人的交感神經(jīng)活動(dòng)增強(qiáng)，并且對OSA病人進(jìn)行有效的鼻部持續(xù)性氣道正壓通氣治療（continuous positive airway pressure,CPAP）可以降低其交感神經(jīng)活動(dòng)和動(dòng)脈壓。此外，有研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)性間歇性低氧（cyclic intermittent hypoxia, CIH）誘發(fā)嚙齒類動(dòng)物的動(dòng)脈壓升高，而且動(dòng)脈壓的升高需要持續(xù)的交感神經(jīng)興奮，因?yàn)镃IH暴露前預(yù)先切斷腎神經(jīng)抑制動(dòng)脈壓的升高。這些結(jié)果說明持續(xù)的交感神經(jīng)興奮是OSA病人全身動(dòng)脈壓升高的關(guān)鍵因素。交感神經(jīng)活動(dòng)可以被外周反射活動(dòng)和中樞交感處理過程影響。大量的研究顯示：CIH暴露動(dòng)物和OSA病人的外周化學(xué)反射敏感性增強(qiáng)，，而化學(xué)敏感性增強(qiáng)有助于交感神經(jīng)興奮和高血壓的發(fā)展。這些數(shù)據(jù)顯示OSA造成的CIH增強(qiáng)病人的外周化學(xué)敏感性，但對CIH增強(qiáng)頸動(dòng)脈體化學(xué)敏感性的機(jī)制的研究很少。 大量的研究指出一氧化氮（nitric oxide, NO）是CIH增強(qiáng)頸動(dòng)脈體化學(xué)敏感性的一種調(diào)質(zhì)。生理濃度的NO對化學(xué)敏感性反應(yīng)主要起抑制作用。NO主要由直接支配頸動(dòng)脈體且胞體位于竇神經(jīng)或舌咽神經(jīng)內(nèi)的神經(jīng)型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase, nNOS）免疫陽性神經(jīng)元合成并釋放。有研究顯示，慢性心衰家兔頸動(dòng)脈體的nNOS表達(dá)減少，并且這種減少有助于增強(qiáng)化學(xué)敏感性。最近，有證據(jù)表明CIH降低大鼠頸動(dòng)脈體nNOS的表達(dá)，但nNOS表達(dá)減少是否增強(qiáng)化學(xué)敏感性仍不清楚。本研究旨在觀察CIH對大鼠頸動(dòng)脈體及頸動(dòng)脈體球細(xì)胞nNOS表達(dá)的影響和CIH對頸動(dòng)脈體內(nèi)NO抑制作用的影響，進(jìn)而探討CIH增強(qiáng)大鼠外周化學(xué)敏感性的機(jī)制。 目的：利用CIH大鼠模型和CIH頸動(dòng)脈體球細(xì)胞，觀察CIH對大鼠頸動(dòng)脈體及頸動(dòng)脈體球細(xì)胞nNOS表達(dá)的影響和CIH對頸動(dòng)脈體內(nèi)NO抑制作用的影響。 方法：1.雄性Sprague-Dawley大鼠，體重240-250g，購于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，在空氣濕度45%~55%，室溫20℃~22℃的環(huán)境下飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分成3組：空白對照組、常氧對照組和CIH組。將CIH組大鼠放置于間歇性低氧艙內(nèi)，予以每天8h共35天的低氧暴露，程序設(shè)計(jì)為每一低氧復(fù)氧循環(huán)時(shí)間為4min，前1min充入100%N2使氧濃度降至8.2%~10%，后3min充入O2使氧濃度恢復(fù)到21%。常氧對照組大鼠放置于同樣的低氧艙內(nèi)，但是向艙內(nèi)沖入空氣而不是氮?dú)夂脱鯕��？瞻讓φ战M放置于標(biāo)準(zhǔn)室內(nèi)條件下飼養(yǎng)。喂養(yǎng)期間動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。35天后取各組大鼠進(jìn)行檢測：（1）大鼠股動(dòng)脈插入導(dǎo)管，檢測大鼠的股動(dòng)脈壓，觀察CIH對大鼠動(dòng)脈壓的作用。（2）記錄常氧條件下，基礎(chǔ)的竇神經(jīng)放電，觀察CIH對大鼠基礎(chǔ)竇神經(jīng)放電的影響。（3）記錄10%低氧條件下，常氧對照組和CIH組大鼠的低氧敏感性竇神經(jīng)放電，觀察CIH對頸動(dòng)脈體化學(xué)敏感性的影響。（4）采用隔離灌流技術(shù)，向大鼠頸動(dòng)脈體內(nèi)分灌注nNOS抑制劑L-omega-nitro arginine （L-NNA0.3mg/kg）、 NO供體S-nitroso-N-acetylpenicillamine（SNAP30nmol/kg）和NO前體L-精氨酸（L-arginine100mg/kg），在10%低氧條件下記錄常氧對照組和CIH組大鼠的竇神經(jīng)放電，觀察CIH對NO抑制作用的影響。（5）采用Western blot和RT-PCR技術(shù),觀察CIH對大鼠頸動(dòng)脈體nNOS蛋白及nNOS mRNA表達(dá)的影響。2.將出生19-21天的SD大鼠的頸動(dòng)脈體取出，用酶消化的方法得到頸動(dòng)脈體球細(xì)胞，然后將細(xì)胞分別在常氧和CIH環(huán)境下培養(yǎng)，CIH程序設(shè)計(jì)為每一低氧復(fù)氧循環(huán)時(shí)間為60分鐘，前35分鐘向低氧培養(yǎng)室內(nèi)沖入100%N2使氧濃度降至0.1%，后25min充入O2使氧濃度恢復(fù)到21%。培養(yǎng)期間CO2濃度一直維持在5%。培養(yǎng)箱溫度維持在37°C。然后分別取對照組和CIH組培養(yǎng)6h、12h、24h和48h的球細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測，在顯微鏡下觀察CIH對單個(gè)球細(xì)胞nNOS蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1CIH對大鼠動(dòng)脈壓的影響 與常氧對照組和空白對照組比較，CIH組大鼠股動(dòng)脈壓明顯升高（n=6;常氧對照組91.5±2.8mmHg;空白對照組90.0±1.0mmHg; CIH組115.8±2.9mmHg; P 0.01）。 2CIH對大鼠基礎(chǔ)竇神經(jīng)放電的影響 與常氧對照組和空白對照組比較，CIH組大鼠的基礎(chǔ)竇神經(jīng)放電明顯增強(qiáng)（n=6;常氧對照組24.2±1.1mV/s;空白對照組22.2±0.89mV/s;CIH組35.9±2.2mV/s; P 0.01）。 3CIH對大鼠竇神經(jīng)低氧敏感性放電的影響 在10%低氧條件下，CIH組的竇神經(jīng)放電與其基礎(chǔ)放電的百分比明顯大于常氧對照組（CIH組623.1±13.5%of baseline;常氧對照組485.6±18.0%of baseline; P 0.01）。 4nNOS抑制劑L-NNA對大鼠竇神經(jīng)低氧敏感性放電的影響 頸動(dòng)脈內(nèi)注入nNOS抑制劑L-NNA明顯的增加了兩組大鼠10%低氧條件下的竇神經(jīng)放電（CIH組699.1±15.6%of baseline, P 0.05;常氧對照組786.4±50.4%of baseline, P 0.01），但是對常氧對照組的影響明顯大于CIH組（P 0.01）。 5NO供體SNAP和NO前體L-arginine對大鼠竇神經(jīng)低氧敏感性放電的影響 頸動(dòng)脈內(nèi)注入NO供體SNAP（CIH組264.0±10.8%of baseline;常氧對照組340.0±9.2%of baseline）和NO前體L-arginine（CIH組390.2±15.6%of baseline;空白對照組238.2±7.7%of baseline）明顯的降低了兩組大鼠10%低氧條件下的竇神經(jīng)放電，但是對CIH組的影響明顯大于常氧對照組（P 0.01）。 6CIH對頸動(dòng)脈體nNOS蛋白及其mRNA表達(dá)的影響 與常氧對照組比較，CIH組大鼠頸動(dòng)脈體內(nèi)的nNOS蛋白及nNOSmRNA表達(dá)均明顯減少（P 0.005）。 7CIH對頸動(dòng)脈體球細(xì)胞nNOS蛋白表達(dá)的影響 免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，與對照組比較，CIH組細(xì)胞的nNOS蛋白表達(dá)減少。 結(jié)論：1.CIH通過降低大鼠頸動(dòng)脈體內(nèi)nNOSmRNA及蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)頸動(dòng)脈體的化學(xué)敏感性。2.CIH降低頸動(dòng)脈體球細(xì)胞nNOS蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：循環(huán)性間歇性低氧 竇神經(jīng)放電 一氧化氮 神經(jīng)型一氧化氮合酶 化學(xué)敏感性
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R766
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料與方法11-16
• 結(jié)果16-19
• 附圖19-28
• 附表28-29
• 討論29-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 綜述 頸動(dòng)脈體內(nèi)一氧化氮作用機(jī)制的研究39-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48-49
• 個(gè)人簡歷49

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Han Chen;Aixuan Wei;Jinting He;Ming Yu;Jing Mang;Zhongxin Xu;;Changes of hypoxia-inducible factor-1 signaling and the effect of cilostazol in chronic cerebral ischemia[J];Neural Regeneration Research;2013年19期

2 馮文龍;鄭顏兒;梁寶成;;外周化學(xué)感受器在睡眠呼吸障礙時(shí)對間歇性低氧適應(yīng)不良反應(yīng)的機(jī)制(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2014年01期

3 張靜;陳寶元;;炎癥過程在阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征相關(guān)的心血管疾病中的作用[J];山東醫(yī)藥;2014年29期

4 陳茜;柴程芝;寇俊萍;余伯陽;;缺氧誘導(dǎo)肺損傷的病理機(jī)制研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年23期

5 陳曉丹;雷

本文編號：541815