本文關鍵詞：攜帶Ang-1基因的骨髓間充質干細胞對早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變模型小鼠的干預研究

  更多相關文章： 早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜眼底病變 促血管生成素-1 骨髓間充質干細胞 視網(wǎng)膜新生血管 動物模型

【摘要】：早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變（Retinopathy of premature，ROP）是早產(chǎn)兒比較常見的眼部疾病，主要由于現(xiàn)在醫(yī)療水平的提高及圍產(chǎn)醫(yī)學的發(fā)展,使早產(chǎn)兒存活率大幅度升高，尤其是對小胎齡兒及低出生體重兒存活率不斷增加，使ROP的發(fā)生概率也呈現(xiàn)上升趨勢。早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變的機理為視網(wǎng)膜的增生，最終因視網(wǎng)膜纖維組織的增生產(chǎn)生牽拉視網(wǎng)膜組織，最終導致失明的嚴重后果，因此現(xiàn)成為眼科及新生兒科極其關注的重點，同時引起了眾多學者的探索。但其具體發(fā)病機制不詳。本文章則從ROP存在明顯血管增生異常著手，首先應用新生幼鼠構建ROP動物模型，再通過應用轉染促血管生成素-1（Angiopoietin-1，Ang-1）基因的骨髓間充質干細胞（Mesenchymal stemcells，MSCs），在不同的生長時間點輸注至模型鼠的體內，通過觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學、HE染色、免疫組化及qRT-PCR方法了解轉染攜帶基因的細胞后，視網(wǎng)膜血管結構形態(tài)變化及Ang1的表達情況，主要目的在于討論攜帶Ang-1基因的MSCs對于ROP新生血管的影響及作用效果，為以后ROP在細胞治療方面提供實驗依據(jù)，從而為臨床研究探討早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變提供研究支持及基礎資料。本實驗共分為兩個部分。 第一部分：早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變模型動物的構建 本部分主要選取新生昆明小鼠，雌雄不限制，隨機分兩組，分別在空氣及高氧下飼養(yǎng)，選取生后17日處死，應用改良的明膠墨汁自小鼠心臟灌注，后取材視網(wǎng)膜鋪片，觀察空氣組和高氧組下眼底視網(wǎng)膜血管的增生、變化情況；同時應用Image-proplus6.0處理軟件，計算兩組視網(wǎng)膜周邊血管的生成率，應用SPSS軟件，查看其是否有統(tǒng)計學意義；同時取眼球行石蠟包塊、切片、HE染色，觀察兩種情況下視網(wǎng)膜細胞層的形態(tài)變化及突出視網(wǎng)膜內界膜新生血管的細胞核數(shù)目。綜合兩點明確該氧誘導ROP動物模型是成功的。 第二部分：攜帶Ang-1基因的MSCs對小鼠ROP模型的干預及影響 本部分首先是MSCs的復蘇、傳代培養(yǎng)及凍存過程，在此過程中掌握關于MSCs的基本培育及保存技術，是本實驗操作的關鍵，同時借助于本實驗課題組李秋平老師進行的病毒轉載Ang-1基因移入MSCs中，并應用DsRed(Red fluorescent protein fromDiscosoma Sp)熒光蛋白技術及單克隆法篩選出轉染成功的細胞，后注入模型鼠體內，為下一步干預治療做準備。并利用（65%±5%）持續(xù)吸氧的方法，成功制成小鼠的ROP模型。通過明膠墨汁視網(wǎng)膜灌注觀察其形態(tài)學、HE染色、免疫組化及qRT-RNA，進一步查看視網(wǎng)膜血管發(fā)育變化及Ang-1的表達。研究發(fā)現(xiàn)，與空氣對照組比較，高氧組視網(wǎng)膜血管走形紊亂，有管腔堵塞所致的無血液充盈區(qū)；同時通過HE染色提示高氧組視網(wǎng)膜各層細胞排列均較亂，且有新生血管內皮細胞進入內界膜，差異有統(tǒng)計學意義；在持續(xù)高氧環(huán)境下，注入Ang-1+MSCs和單純MSCs不管在視網(wǎng)膜血管形態(tài)，還是促進Ang-1表達上均有優(yōu)化及促進作用，對視網(wǎng)膜異常血管有一定修復功能；且進一步實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計得知，無論從觀察視網(wǎng)膜鋪片后的形態(tài)還是HE染色的，Ang-1+MSCs注入組效果明顯好于MSCs組，提示前兩者之間在調節(jié)血管生成方面有協(xié)同作用。
【關鍵詞】：早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜眼底病變 促血管生成素-1 骨髓間充質干細胞 視網(wǎng)膜新生血管 動物模型
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 前言10-11
• 第一部分 高氧誘導新生兒 ROP 模型的建立11-21
• 一、 材料與儀器11-13
• 二、 實驗方法13-14
• 三、 新生鼠 ROP 模型建立效果14-17
• 四、 討論17-20
• 五、 參考文獻20-21
• 第二部分 攜帶 Ang-1 基因的骨髓 MSCs 對 ROP 模型鼠干預研究21-46
• 一、 小鼠 MSCs 的復蘇、傳代培養(yǎng)及凍存23-24
• 二、 攜帶 ANG-1 基因的慢病毒轉染小鼠 MSCs24
• 三、 小鼠 MSCs 細胞的復蘇、傳代培養(yǎng)、凍存及轉染基因后結果觀察24-25
• 四、 細胞治療的動物實驗階段25-40
• (一) 材料與設備25-27
• (二) 動物實驗方法27-28
• (三) 檢測方法28-34
• (四) 實驗結果34-40
• 五、 討論40-44
• 參考文獻44-46
• 文獻綜述46-53
• 參考文獻50-53
• 在讀期間的成果53-54
• 致謝54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙勇;任兵;高曉唯;高云仙;李霞;李慧;郭繼華;;TNP470治療高氧誘導幼鼠視網(wǎng)膜病變的作用[J];國際眼科雜志;2007年04期

2 盧秀珍;畢宏生;崔彥;左振剛;;外源性VEGF及Ang-1對大鼠CNV的作用及機制探討[J];國際眼科雜志;2010年10期

3 底煜;陸巖;王愛媛;楊樝;楊宏偉;陳曉隆;;早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變研究進展[J];國際眼科雜志;2011年07期

4 趙巖松;趙堪興;王曉莉;陳玉璽;王麗;牟青杰;;骨髓間充質干細胞移植對視網(wǎng)膜病變新生大鼠視網(wǎng)膜細胞凋亡的影響[J];中國當代兒科雜志;2012年12期

5 徐志剛;呂淑慧;穆敬中;張雪巖;齊艷秀;朱金玲;;骨髓間充質干細胞在視網(wǎng)膜移植領域的研究進展[J];國際眼科雜志;2013年01期

6 唐爍;包蕾;;從分子水平上尋求防治早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變的方法[J];兒科藥學雜志;2013年04期

7 阮豫才;唐蘭芬;;血管內皮生長因子與早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變[J];海南醫(yī)學;2011年02期

8 劉瑤瑤;陶玉香;徐海偉;;骨髓間充質干細胞的生物學特性及其應用進展[J];西部醫(yī)學;2009年08期

9 張正培,陳欽元,佘振鈺,陳榮家,徐格致,胡寶洋,周國民;氧誘導的血管增生性視網(wǎng)膜病變小鼠模型[J];眼科研究;2003年05期

10 劉君;徐皓;陳建梅;姚曉東;;ANG-1基因重組腺病毒載體的構建及其轉染骨髓間充質干細胞的實驗研究[J];中國骨科臨床與基礎研究雜志;2011年03期

，

本文編號：522768