本文關(guān)鍵詞：法舒地爾在大鼠視神經(jīng)損傷中的保護(hù)作用及對(duì)ET-1和HIF-1α的表達(dá)影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:視神經(jīng)損傷再生及功能的恢復(fù)是眼科學(xué)臨床科研亟待解決的難題,它是眼科疾病中致盲的主要病因之一。臨床有許多研究證明視神經(jīng)損傷后主要病理改變是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal ganglion cells,RGCs)軸索發(fā)生潰變,導(dǎo)致軸漿運(yùn)輸障礙最終使視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的水腫和凋亡[1]。因此目前的研究多集中在預(yù)防和減緩視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡和促進(jìn)其再生兩個(gè)方面�，F(xiàn)階段多局限在藥物治療為主,但是因許多藥物的副作用和局限性,限制了在眼科的應(yīng)用。所以當(dāng)下如何尋找到一種不良反應(yīng)少,而且對(duì)視神經(jīng)有保護(hù)作用的藥物成為世界眼科所面臨的一個(gè)瓶頸。法舒地爾作為一種Rho激酶(Rho-associated kinase,ROCK)抑制劑主要作用于抗血管的痙攣,適用于多種原因引起心腦血管的缺血性病變,主要變現(xiàn)在:缺血性腦卒中,短暫性腦缺血,基底動(dòng)脈供血不足及缺血,蛛網(wǎng)膜下腔出血后引起的遲發(fā)性腦血管病,顱腦外傷后及治療當(dāng)中引起的腦血管的痙攣,腦出血后的修復(fù)期。目前有臨床研究證明在腦損傷中法舒地爾可有效的抑制自由基的產(chǎn)生,改善腦血流量,并且對(duì)雙側(cè)陣發(fā)性頸總動(dòng)脈痙攣引起的大鼠腦缺血后的繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞損傷有抑制作用,保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞。由近期研究來看法舒地爾已成為神經(jīng)保護(hù)類藥物的新的熱點(diǎn),但是對(duì)視神經(jīng)的保護(hù)還罕有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)是制作大鼠視神經(jīng)不完全損傷模型,通過觀察視神經(jīng)損傷后,未經(jīng)處理的大鼠視網(wǎng)膜HE染色形態(tài)學(xué)改變,免疫組織化學(xué)染色半定量檢測(cè)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)內(nèi)皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表達(dá)狀況,和腹腔注射法舒地爾后兩者間的變化趨勢(shì)。探討法舒地爾在視神經(jīng)損傷保護(hù)中的意義,旨在臨床應(yīng)用中提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù),從而為將來研究拓展新思路。方法:選取雄性SD大鼠60只作為研究對(duì)象,確保清潔及健康,質(zhì)量(200±10)g(購買于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心),并對(duì)其外眼和眼底進(jìn)行檢查,正常者進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)進(jìn)行分組:其中正常組12只大鼠雙眼(24只),生理鹽水組即對(duì)照組24只大鼠單眼(24只),法舒地爾組即治療組24只大鼠單眼(24只)。不對(duì)正常組進(jìn)行任何處理,治療組和對(duì)照組均進(jìn)行視神經(jīng)鉗夾法建立右眼視神經(jīng)不完全損傷模型,分別對(duì)治療組和對(duì)照組腹腔注射法舒地爾10mg/kg和等量的生理鹽水,每日一次。分別于實(shí)驗(yàn)3天,7天,14天,21天摘除大鼠右眼球,隨機(jī)抽取正常組3只大鼠摘除雙眼(6只眼),治療組和對(duì)照組分別隨機(jī)各抽取6只大鼠摘除單眼(共12只眼),固定,包埋,切片,制備標(biāo)本。以視盤上2mm范圍內(nèi)的視網(wǎng)膜作為觀察對(duì)象,其中視網(wǎng)膜組織HE染色在光鏡下觀察視網(wǎng)膜細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量的變化;免疫組織化學(xué)染色中觀察視網(wǎng)膜組織中ET-1和HIF-1α的表達(dá)變化,計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)半定量檢測(cè)視網(wǎng)膜組織中ET-1和HIF-1α的平均光密度值(Average optical density,AOD),以免疫染色陽性AOD值來表示抗原表達(dá)量,AOD值越高則陽性表達(dá)越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為正太分布計(jì)量資料,數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,同一組內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)運(yùn)用單因素方差分析,不同組間同一時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1視網(wǎng)膜組織HE染色光鏡下相態(tài)1.1正常組由于大鼠未經(jīng)視神經(jīng)不完全損傷處理,視網(wǎng)膜HE染色后可見視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)層次分明,從內(nèi)向外依次為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(RGCs層)、雙極細(xì)胞層、感光細(xì)胞層。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞排列整齊規(guī)則,其余兩層排列緊密,染色均勻,細(xì)胞形態(tài)規(guī)整,細(xì)胞未見病理學(xué)改變。1.2對(duì)照組損傷3天后,各別細(xì)胞出現(xiàn)空泡變樣改變及水腫,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層排列紊亂,內(nèi)核層及外核層也有不同程度變薄;損傷7天后,整個(gè)視野出現(xiàn)多數(shù)空泡樣改變,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層胞核明顯稀少,胞核呈固縮狀態(tài),包漿染色不均,水腫加重。內(nèi)、外核層細(xì)胞排列疏松、紊亂。損傷后14天視網(wǎng)膜的大部分神經(jīng)節(jié)細(xì)胞可見空泡樣改變,胞核溶解包漿淡染,細(xì)胞數(shù)目明顯變少,水腫有加重趨勢(shì)。內(nèi)、外核層的細(xì)胞紊亂程度加重。損傷后21天視網(wǎng)膜的細(xì)胞病理學(xué)改變較3-14天進(jìn)一步加重。1.3治療組損傷后3天,視網(wǎng)膜輕微水腫,各層結(jié)構(gòu)未見明顯變化,內(nèi)、外核層細(xì)胞間隙稍微增大,和對(duì)照組比較,細(xì)胞間隙小,排列緊密、規(guī)整。損傷7天視網(wǎng)膜水腫加重,各層細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞間隙增大,出現(xiàn)空泡樣變性,但較對(duì)照組輕。損傷14天,多數(shù)細(xì)胞排列整齊,水腫好轉(zhuǎn),和對(duì)照組比明顯減輕。損傷后21天,視網(wǎng)膜各層形態(tài)改變趨于平穩(wěn)狀態(tài),形態(tài)優(yōu)于對(duì)照組。有此可得出各時(shí)間點(diǎn)治療組視網(wǎng)膜各層細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量和水腫程度和對(duì)照組比較均明顯減輕,但較正常組差。2視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量變化正常組平均RGCs數(shù)無明顯差異,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;對(duì)照組3、7、14、21天平均RGCs數(shù)為17.430±1.448、12.055±0.778、7.903±0.800、3.903±0.794個(gè);治療組3、7、14、21天平均RGCs數(shù)為21.305±1.558、15.342±1.439、10.336±0.826、6.830±0.799個(gè)(每×400倍光鏡視野)。由此可見,視神經(jīng)損傷后對(duì)照組、治療組RGCs數(shù)目均呈下降趨勢(shì),但治療組RGCs數(shù)均高于對(duì)照組RGCs數(shù),差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3免疫組化結(jié)果3.1視網(wǎng)膜組織中ET-1的表達(dá)在大鼠視網(wǎng)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層表達(dá),呈棕黃色染色。在正常視網(wǎng)膜組織中ET-1呈弱陽性表達(dá)平均光密度值為0.142±0.027,各時(shí)間點(diǎn)無變化。對(duì)照組在損傷后的3天、7天、14天時(shí)ET-1平均光密度值為0.270±0.038、0.350±0.037、0.290±0.037,均較正常組升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),7天后表達(dá)相繼平緩,14到21天時(shí)有所下降,21天平均光密度值為0.256±0.037。治療組與對(duì)照組相比,在損傷后各時(shí)間點(diǎn)ET-1的陽性表達(dá)較對(duì)照組均明顯減弱,平均光密度值分別為0.250±0.039、0.303±0.035、0.224±0.035、0.174±0.035,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),但均強(qiáng)于正常組。3.2視網(wǎng)膜組織中HIF-1α的表達(dá)呈棕黃色染色,主要表達(dá)在視網(wǎng)膜的內(nèi)、外叢狀層和外核層的胞漿中。其在正常視網(wǎng)膜組織中HIF-1α無明顯陽性表達(dá),各時(shí)間點(diǎn)顯著顯變化。對(duì)照組HIF-1α在損傷后3天表達(dá)開始升高,7天時(shí)表達(dá)升高明顯,14天上升平緩開始下降,直至21天仍高于正常組,平均光密度值分別為0.137±0.029、0.212±0.028、0.358±0.034、0.284±0.029,各時(shí)間點(diǎn)較正常組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。治療組與對(duì)照組相比,在實(shí)驗(yàn)的3天、7天、14天、21天HIF-1α的陽性表達(dá)均明顯降低,平均光密度值分別為0.113±0.029、0.193±0.029、0.316±0.032、0.254±0.029,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1視神經(jīng)損傷初期出現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷和凋亡,腹腔注射法舒地爾可以減輕視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷,對(duì)視神經(jīng)損傷后有一定的保護(hù)作用。2由上述實(shí)驗(yàn)表明視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜的ET-1的表達(dá)顯著升高,說明ET-1參與了視神經(jīng)損傷的過程,而法舒地爾可以有效地抑制ET-1的升高,發(fā)揮視神經(jīng)保護(hù)作用。3視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的HIF-1α的表達(dá)明顯高于正常組,證明HIF-1α參與了視神經(jīng)損傷的過程,腹腔注射法舒地爾抑制了HIF-1α的表達(dá),表明法舒地爾對(duì)視神經(jīng)的保護(hù)和抑制HIF-1α的表達(dá)有關(guān)系。4通過以上結(jié)果說明法舒地爾對(duì)視神經(jīng)損傷修復(fù)有促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：法舒地爾 視神經(jīng)損傷 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 內(nèi)皮素-1 缺氧誘導(dǎo)因子-1α
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R774.6
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-36
• 附表36-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述 法舒地爾在神經(jīng)保護(hù)領(lǐng)域的新進(jìn)展46-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

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2 張偉,高伯元,馮華;視神經(jīng)損傷行視神經(jīng)管減壓1例[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年05期

3 王計(jì)花;間接性視神經(jīng)損傷23例臨床分析[J];山西醫(yī)藥雜志;2003年04期

4 王斌,劉紹光;視神經(jīng)管顯微減壓開放術(shù)治療視神經(jīng)損傷16例[J];山東醫(yī)藥;2005年26期

5 李ng ,岳文龍;間接性視神經(jīng)損傷25例診治分析[J];中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2005年07期

6 洪國(guó)良,岳樹源;視神經(jīng)損傷的外科治療[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè);2005年05期

7 李娜;劉連新;;家貓視神經(jīng)損傷的病理學(xué)改變[J];山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào);2005年05期

8 魏德;王開宇;黃繩躍;;視神經(jīng)管顯微減壓開放術(shù)治療視神經(jīng)損傷16例臨床分析[J];福建醫(yī)藥雜志;2007年01期

9 李耀峰;孫霞;;彩色多普勒超聲在間接性視神經(jīng)損傷診斷中的應(yīng)用[J];眼科研究;2007年12期

10 金淑萍;;32例視神經(jīng)損傷患者的臨床治療分析[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2008年02期

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2 王志軍;;病案9 間接性視神經(jīng)損傷[A];第十次全省中、西醫(yī)眼科學(xué)術(shù)交流會(huì)（暨吉安地區(qū)眼科專委會(huì)成立會(huì)議）學(xué)術(shù)論文集[C];2010年

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