[目的]初步探索攜帶不同啟動子同種血清型的重組腺相關(guān)病毒（rAAV）在正常樹鼩視網(wǎng)膜中傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)染的情況,為通過基因載體傳導(dǎo)技術(shù)治療視網(wǎng)膜疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。觀察形覺剝奪性弱視樹鼩視網(wǎng)膜中視錐細(xì)胞以及雙極細(xì)胞的數(shù)量和結(jié)構(gòu)是否有改變,初步探討弱視疾病發(fā)生發(fā)展過程中視網(wǎng)膜的可塑性改變,為進(jìn)一步認(rèn)識、了解弱視有關(guān)的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。[方法]1.樹鼩選用出生50天的正常樹鼩10只,病毒選用rAAV-mCAR-mCherry-WPREs-pA 和 rAAV-Grm6-SV40-EYFP-WPRE-pA 兩種含不同啟動子的rAAV9型病毒,分別經(jīng)眼部注射視網(wǎng)膜下間隙。病毒注射28天后進(jìn)行取材,分別制作視網(wǎng)膜平鋪片及視網(wǎng)膜冰凍切片,通過熒光顯微鏡及激光共聚焦顯微鏡觀察視網(wǎng)膜視錐細(xì)胞及雙極細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況。2.選取出生18天左右未開眼的樹鼩幼崽共36只,隨機(jī)分為6組,建立形覺剝奪性弱視模型:形覺剝奪性弱視模型組:N1（縫合右眼2月,共6只）、N4（縫合右眼1月,共6只）;形覺剝奪性弱視恢復(fù)模型組:N2（縫合右眼1月后打開,雙眼正常視物1月,共6只）、N3（縫合右眼1月后打開,換行遮蓋左眼1月,共6只）;... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２獨(dú)立送風(fēng)隔離詞養(yǎng)籠??２．?２重組腺相關(guān)病毒包裝??（１）?ｒＡＡＶ－ｍＣＡＲ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＷＰＲＥｓ－ｐＡ質(zhì)粒構(gòu)建，以??

２．?３?ｒＭＶ－ｍＣＡＲ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＷＰＲＥｓ－ｐＡ?和?ｒＭＶ－Ｇｒｍ６－ＳＶ４０－ＥＹＦＰ－ＷＰＲＥ－ｐＡ?經(jīng)眼視網(wǎng)??膜注射??（１）制作、準(zhǔn)備注射針（圖３）：將毛細(xì)采血管加熱后經(jīng)拉針儀器，使針??頭孔徑被拉至ｌＯＯｕｍ大小，檢查針頭通暢性并用酒精消毒。將１０ｕｌ微量進(jìn)樣針??內(nèi)注滿石蠟油，針頭內(nèi)也注滿石蠟油后，插到進(jìn)樣器上，用膠槍密封針頭與進(jìn)樣??器之間的縫隙，檢查其密閉性。??二?”賞—?？?＇?－?？?：?■?？．?：?？?■?．．??圖３密封后微量注射器及針頭??２０??

第一部分「ＡＡＶ９在樹駒視網(wǎng)膜中應(yīng)用的可行性???（２）注射前一天下午樹駒經(jīng)１％阿托品滴眼液散瞳１次，注射當(dāng)天上午８：??０？１０：?００注射前２ｈ，給予復(fù)方托吡卡胺滴眼液快速散瞳，每３０?ｍｉｎ?１次，４??（對照眼給予相同術(shù)前準(zhǔn)備）。??（３）所有的手術(shù)都是在專用的動物眼科手術(shù)實(shí)驗(yàn)室中，在無菌的條件下進(jìn)??的，將樹駒從獨(dú)立送風(fēng)隔離籠具中取出，稱重后放在超凈工作臺上，按照２％??巴比妥５ｎｉｌ／ｋｇ，進(jìn)行全身麻醉，鉗夾四肢沒有明顯反射反應(yīng)后，剪掉部分較長??須、備皮，放在３６．?５°Ｃ保溫臺上維持體溫，頭部墊高，用碘伏消毒液進(jìn)行右??皮膚消毒，眼表滴入鹽酸奧布卡因滴眼液局部麻醉，５分鐘后再滴入復(fù)方托吡??胺滴眼液，助手固定樹齣的體位，眼科手術(shù)顯微鏡下觀察其右眼瞳孔擴(kuò)大，眼??滴少量生理鹽水形成透鏡效應(yīng)觀察眼底后，用眼科鑷將上下眼瞼拉開，充分暴??眼球，在眼顳上方先用３０Ｇ快穿針頭，針頭斜面向上垂直進(jìn)入鞏膜全層的７５％??度時，將針尖方向改為平行于鞏膜前表面進(jìn)入，制作隧道（圖４）。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3214991