隨著遺傳性耳聾致病基因和作用機(jī)制的深入研究,越來(lái)越多的科研工作者把工作重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到基因型表型相關(guān)性研究領(lǐng)域。本論文首先進(jìn)行了文獻(xiàn)研究,篩選出了南方地區(qū)非綜合征性耳聾患者GJB2基因、SLC26A4基因和和mtDNA 12S rRNA基因上存在的20個(gè)SNP突變熱點(diǎn);建立了基于這些SNP位點(diǎn)的多重PCR、單堿基延伸和基因芯片檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合對(duì)遺傳性耳聾致病基因分型方法;設(shè)計(jì)了點(diǎn)制41條探針,共6個(gè)Arrays,每個(gè)Array分布了144個(gè)信號(hào)點(diǎn)耳聾分型芯片,每張芯片可檢測(cè)6個(gè)樣本。結(jié)果表明:該基因分型芯片的檢測(cè)靈敏度為75pg;用一代測(cè)序確診的23例患者樣本進(jìn)行測(cè)試,結(jié)果檢測(cè)特異性為100%,假陽(yáng)性0%;數(shù)據(jù)的批間差10%以下。擴(kuò)大樣本數(shù)至南方地區(qū)235例非綜合征性耳聾患者樣本,研究發(fā)現(xiàn)67例攜帶GJB2突變基因,其中c.235delC突變34例（14.17%）,c.109G>A突變10例（10.21%）;發(fā)現(xiàn)31例攜帶SLC26A4突變基因,其中c.919-2A>G20例（8.51%）,c.2168A>G 9例（3.83%）;發(fā)現(xiàn)線粒體DNA 12S rRNA基因存在m.1... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

研究路線圖

上海交通大學(xué)工程碩士學(xué)位論文表 2-1 不同飽和鹽溶液的相對(duì)濕度Table2-1Relative humidity of different saturated salt solutionsSatutated saltsolutionsRelative humidity at different temperatures (℃)15 20 25 30 40CaCl2 6H2O 0.35 0.32 0.29 0.26K2CO3 2H2O 0.44 0.45Ca(NO3)2 4H2O 0.60 0.55 0.50 0.45NaBr 2H2O 0.61 0.59 0.57 0.55NaCl 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75KCl 0.86 0.85 0.85

c)圖 2-2 遺傳性耳聾基因 SNP 分型基因芯片探針?lè)植糰: 一張耳聾基因芯片上有 6 個(gè)相同的 Array，每個(gè) Array 用圍欄分離成單獨(dú)的區(qū)域，每個(gè)區(qū)域能檢測(cè)一個(gè)樣本；b：芯片雜交后，通過(guò)結(jié)合的 cy3 標(biāo)記特異熒光探針讀取熒光信號(hào)，每個(gè) Array 上的探針組合均相同；c：探針在芯片上的位置信息，P 為陽(yáng)性對(duì)照，N 為陰性對(duì)照，B 為空白對(duì)照。Fig. 2-2 Layout of oligonucleotide probes in the hereditary deafness gene SNP chipa:A microarray was composed of six identical arrays, each of which is separted by a rectangle intoscanning area of a sample;b: After hybridization, the fluorescence signal was read by thecombination of the cy3 marker specific fluorescent probe, and each array had same combinationof triplicate oligonucletide probes; c: Position information of probe on the chip. P means PositiveProbe, N denotes Negative Probe, B represents Blank (Spotting buffer).

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]多重PCR技術(shù)在植物生物學(xué)研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 任素賢,艾鵬飛,宋層孝,陳文靜,宋建軍.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(06)

博士論文
[1]遺傳性耳聾基因診斷新技術(shù)的研究和應(yīng)用與非綜合征性耳聾家系的分子遺傳學(xué)研究[D]. 門(mén)美超.中南大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3214815