發(fā)布時間：2021-01-26 02:08

　　視網膜色素上皮細胞（the retinal pigment epithelium，RPE）在功能異常、病變或死亡時會引發(fā)多種嚴重的視網膜疾病。對于這些疾病，目前普遍采用的是細胞移植治療方法。但是，由于細胞來源有限，并存在免疫排斥反應，RPE移植治療有很大局限性。為此，需要人工體外生產大量的RPE用于視網膜相關疾病的治療。但是目前人們對于RPE分化機制還了解不夠，迫切需要對其分化機制深化研究。本實驗室之前已經探索過RPE分化過程的情況，得到了較為詳細的數(shù)據(jù)，我在此基礎上進一步研究miRNA對RPE分化及去分化的機制。本研究選擇ARPE-19及hfRPE兩個不同的RPE系作為研究材料，針對RPE分化相關信號通路中的關鍵成員，分析其潛在的miRNA作用靶點，找到可能對其起調控作用的miRNAs。然后通過QPCR檢測，免疫染色，流式細胞周期分析及雙熒光酶標報告基因驗證等方法，確定了miR-204/211對RPE分化及去分化的關鍵調控作用。研究結果小結如下：1.通過文獻挖掘及生物信息學分析，我們獲得了一批可能調控RPE分化和功能維持的miRNAs。采用QPCR方法鑒定出在兩個細胞系中均高表達的m... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

視網膜結構示意圖及視網膜色素變性Figure1Schematicdiagramoftheretinaandretinalpigmentdegeneration

另一種相對成熟的細胞類型（圖 2）。目前，譜系重編程已經證實能有效將終末分化的成纖維細胞成功的神經元樣細胞[33; 34]、肝臟前體樣細胞[35]、心肌細胞等[36; 37]�；鄣葮嫿藚⑴c視網膜發(fā)育的不同時期和 RPE 形成 8 個轉錄因，Pax6，Mitf，Otx2 ，Nrl ， Klf4 和 c-myc）組成的逆轉錄病將人成纖維細胞直接重編程為視網膜色素上皮樣細胞；并且通過t1::EGFP 報告基因系統(tǒng)，檢測到 RPE 特異性基因的有效表達[38]。在外源轉錄因子的作用下能夠直接譜系重編程為 RPE。

專一性 RNA 內切酶 Dicer 進一步進行加工，將其加工成長度 miRNA：miRNA*雙螺旋結構。最后，由解旋酶負責將雙螺并結合到 RISC 中，與靶基因結合形成基因沉默復合體，最抑制靶基因的翻譯[54; 55; 56]（圖 3）。


本文編號：3000291