發(fā)布時(shí)間：2021-01-26 02:08

　　視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（the retinal pigment epithelium，RPE）在功能異常、病變或死亡時(shí)會(huì)引發(fā)多種嚴(yán)重的視網(wǎng)膜疾病。對(duì)于這些疾病，目前普遍采用的是細(xì)胞移植治療方法。但是，由于細(xì)胞來(lái)源有限，并存在免疫排斥反應(yīng)，RPE移植治療有很大局限性。為此，需要人工體外生產(chǎn)大量的RPE用于視網(wǎng)膜相關(guān)疾病的治療。但是目前人們對(duì)于RPE分化機(jī)制還了解不夠，迫切需要對(duì)其分化機(jī)制深化研究。本實(shí)驗(yàn)室之前已經(jīng)探索過(guò)RPE分化過(guò)程的情況，得到了較為詳細(xì)的數(shù)據(jù)，我在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究miRNA對(duì)RPE分化及去分化的機(jī)制。本研究選擇ARPE-19及hfRPE兩個(gè)不同的RPE系作為研究材料，針對(duì)RPE分化相關(guān)信號(hào)通路中的關(guān)鍵成員，分析其潛在的miRNA作用靶點(diǎn)，找到可能對(duì)其起調(diào)控作用的miRNAs。然后通過(guò)QPCR檢測(cè)，免疫染色，流式細(xì)胞周期分析及雙熒光酶標(biāo)報(bào)告基因驗(yàn)證等方法，確定了miR-204/211對(duì)RPE分化及去分化的關(guān)鍵調(diào)控作用。研究結(jié)果小結(jié)如下：1.通過(guò)文獻(xiàn)挖掘及生物信息學(xué)分析，我們獲得了一批可能調(diào)控RPE分化和功能維持的miRNAs。采用QPCR方法鑒定出在兩個(gè)細(xì)胞系中均高表達(dá)的m... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)示意圖及視網(wǎng)膜色素變性Figure1Schematicdiagramoftheretinaandretinalpigmentdegeneration

另一種相對(duì)成熟的細(xì)胞類型（圖 2）。目前，譜系重編程已經(jīng)證實(shí)能有效將終末分化的成纖維細(xì)胞成功的神經(jīng)元樣細(xì)胞[33; 34]、肝臟前體樣細(xì)胞[35]、心肌細(xì)胞等[36; 37]。慧等構(gòu)建了參與視網(wǎng)膜發(fā)育的不同時(shí)期和 RPE 形成 8 個(gè)轉(zhuǎn)錄因，Pax6，Mitf，Otx2 ，Nrl ， Klf4 和 c-myc）組成的逆轉(zhuǎn)錄病將人成纖維細(xì)胞直接重編程為視網(wǎng)膜色素上皮樣細(xì)胞；并且通過(guò)t1::EGFP 報(bào)告基因系統(tǒng)，檢測(cè)到 RPE 特異性基因的有效表達(dá)[38]。在外源轉(zhuǎn)錄因子的作用下能夠直接譜系重編程為 RPE。

專一性 RNA 內(nèi)切酶 Dicer 進(jìn)一步進(jìn)行加工，將其加工成長(zhǎng)度 miRNA：miRNA*雙螺旋結(jié)構(gòu)。最后，由解旋酶負(fù)責(zé)將雙螺并結(jié)合到 RISC 中，與靶基因結(jié)合形成基因沉默復(fù)合體，最抑制靶基因的翻譯[54; 55; 56]（圖 3）。


本文編號(hào)：3000291