發(fā)布時(shí)間：2020-12-17 22:14

　　[目的]:本課題組前期發(fā)現(xiàn)鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin,CRT）在鼻咽癌組織中高表達(dá),通過誘導(dǎo)鼻咽癌CNE2細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）促進(jìn)其遷移侵襲。本文旨在探究CRT誘導(dǎo)鼻咽癌CNE2細(xì)胞EMT相關(guān)信號(hào)通路,及其促遷移侵襲的分子機(jī)制。[方法]:（1）采用Ensembl在線生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)NRP1的啟動(dòng)子區(qū)域序列,然后通過Jaspar軟件預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),分析TGF-β/Smads信號(hào)通路中調(diào)控神經(jīng)纖毛蛋白1（Neuropilin-1,NRP1）表達(dá)最佳轉(zhuǎn)錄因子。（2）將Si-CRT瞬時(shí)轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞CNE2細(xì)胞（設(shè)陰性對(duì)照Si-NControl）,運(yùn)用Western blot檢測(cè)CRT低表達(dá)后細(xì)胞中SMAD3與其磷酸化、NRP1表達(dá)水平。（3）利用SMAD3特異性磷酸化抑制劑SIS3處理CNE2細(xì)胞,Western blot檢測(cè)抑制SMAD3蛋白磷酸化后CRT與NRP1表達(dá)情況。（4）通過Western blot檢測(cè)CNE2細(xì)胞中CRT低表達(dá)以及抑制SMAD3磷酸化后EMT相關(guān)蛋白E-cadherin... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)CNE2中NRP1的表達(dá)（SP法）

圖 3.2 熒光顯微鏡下觀察 CEN2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率A 為轉(zhuǎn)染后白光下觀察結(jié)果（40 倍），B 為轉(zhuǎn)染后 RFP 熒光通道下觀察結(jié)果（40 倍）空白 NC si-CRTCRTβ-actin

Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后CEN2細(xì)胞中CRT蛋白的表達(dá)與空白組和NControl組相比，P=0.000

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：2922795