第一部分雙醋瑞因滴眼液多次給藥的小鼠角膜藥代動(dòng)力學(xué)研究目的研究雙醋瑞因滴眼液多次給藥與單次給藥的角膜藥代動(dòng)力學(xué)差異。方法以2%雙醋瑞因?yàn)閷?shí)驗(yàn)滴眼液,選取健康無(wú)眼疾的雄性昆明白小鼠,隨機(jī)分為多次給藥組和單次給藥組,雙眼結(jié)膜囊分別給予雙醋瑞因滴眼液。多次給藥組間隔2 min給藥一次,共給藥3次;單次給藥組僅給藥1次。用高效液相法測(cè)定角膜中雙醋瑞因的代謝產(chǎn)物(大黃酸)的濃度,多次給藥組和單次給藥組的時(shí)間點(diǎn)均為5min、15min、30min、60min、120min、180min。將小鼠角膜組織中的藥物濃度經(jīng)藥物動(dòng)力學(xué)程序(DAS2.1.1)進(jìn)行擬合,并計(jì)算相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果結(jié)膜囊多次給藥組和單次給藥組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)角膜中均可檢測(cè)到其活性代謝產(chǎn)物大黃酸;多次給藥組和單次給藥組在5min的濃度分別為(318.678±40.88)μg/g和(145.17±19.29)μg/g。兩組角膜中大黃酸的含量均于給藥后5min最高,多次給藥組濃度高于單次給藥組濃度(P0.01)。隨時(shí)間延長(zhǎng)大黃酸的濃度逐漸下降,3 h后多次給藥組濃度仍高于單次給藥組(P0.01)。多次給藥組半衰期為(1.48±0.33)h,單次給藥組半衰期為(0.89±0.31)h。結(jié)論結(jié)膜囊多次給藥與單次給藥相比具有藥物有效濃度高、維持時(shí)間長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)。第二部分雙醋瑞因滴眼液減輕真菌性角膜炎炎癥反應(yīng)及組織破壞作用機(jī)理的研究目的研究雙醋瑞因滴眼液減輕真菌性角膜炎炎癥及組織破壞的作用及機(jī)理,以期為真菌性角膜炎的治療提供新的依據(jù)。方法雄性C57BL/6J小鼠45只,SPF級(jí),周齡8-12周。實(shí)驗(yàn)分為單純模型組、那他霉素組和那他霉素+雙醋瑞因組,每組30只眼(n=30)。應(yīng)用裂隙燈顯微鏡分別在造模成功后18 h、36 h、48h、72h、96h、120h、144h、168h對(duì)小鼠眼表進(jìn)行觀察拍照并對(duì)角膜病變程度進(jìn)行臨床評(píng)分。處死小鼠后,取角膜組織進(jìn)行角膜整鋪片免疫熒光染色,分別用FITC anti-mouse Ly-6G、鈣熒光白(Calcofluor White,CFW)標(biāo)記中性粒細(xì)胞和真菌菌絲。應(yīng)用雙光子激光掃描顯微鏡對(duì)角膜緣、旁中央及中央角膜進(jìn)行Z軸掃描,測(cè)定每個(gè)角膜內(nèi)中性粒細(xì)胞體積和真菌負(fù)荷量。使用酶聯(lián)免疫吸附劑法(ELISA)對(duì)小鼠角膜內(nèi)的IL-1、IL-6、ICAM-1、MIP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-13的含量進(jìn)行測(cè)定,并對(duì)MMPs的活性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果1從各組小鼠角膜臨床評(píng)分來(lái)看,那他霉素組36h、72h、96h、120h、144h、168h小鼠角膜臨床評(píng)分較單純模型組顯著降低(均為P0.05);那他霉素+雙醋瑞因組36h、48h、72h、96h、120h、144h、168h小鼠角膜臨床評(píng)分較單純模型組顯著降低(均為P0.05),72h、96h、120h、144h、168h小鼠角膜臨床評(píng)分較那他霉素組顯著降低(均為P0.05)。單純模型組、那他霉素組和那他霉素+雙醋瑞因組的小鼠角膜穿孔率分別為60%、40%、20%。那他霉素+雙醋瑞因組的小鼠角膜穿孔率與單純模型組相比,差異顯著(χ~2=8.403 P=0.004)。2在用藥后小鼠角膜真菌負(fù)荷量明顯減少,那他霉素組在36h小鼠角膜真菌負(fù)荷量明顯低于單純模型組(P0.05);雙醋瑞因組在48h小鼠角膜真菌負(fù)荷量明顯低于單純模型組(P0.05)。48h和72h那他霉素組小鼠角膜中性粒細(xì)胞體積少于單純模型組(P0.05);48h、72h和120h那他霉素+雙醋瑞因組小鼠角膜中性粒細(xì)胞體積少于單純模型組(P0.05);72h那他霉素+雙醋瑞因組小鼠角膜中性粒細(xì)胞體積少于那他霉素組(P0.05)。3給予雙醋瑞因滴眼液后IL-1和IL-6的表達(dá)明顯下降,48h和72h那他霉素組和那他霉素+雙醋瑞因組IL-1的表達(dá)較單純模型組顯著下降(P0.05);72h那他霉素+雙醋瑞因組IL-1的表達(dá)較那他霉素組顯著下降(P0.05);120h那他霉素+雙醋瑞因組IL-1的表達(dá)較單純模型組顯著下降(P0.05)。在使用那他霉素和雙醋瑞因60h后,IL-6在真菌性角膜炎小鼠模型中的表達(dá)降低,其中那他霉素+雙醋瑞因組低于那他霉素組(P0.05)。4給予雙醋瑞因滴眼液后MIP-2和ICAM-1的表達(dá)明顯下降,72h那他霉素組和那他霉素+雙醋瑞因組MIP-2的表達(dá)較單純模型組顯著下降(P0.05);120h那他霉素+雙醋瑞因組MIP-2的表達(dá)較單純模型組顯著下降(P0.05)。72h那他霉素組ICAM-1的表達(dá)明顯低于單純模型組(P0.05);那他霉素+雙醋瑞因組ICAM-1的表達(dá)明顯低于單純模型組和那他霉素組(P0.05)。5給予雙醋瑞因滴眼液后MMPs的表達(dá)和活性也得到有效控制,那他霉素組和那他霉素+雙醋瑞因組的MMP-8表達(dá)在48h和72h較單純模型組顯著降低(P0.05);那他霉素+雙醋瑞因組MMP-8的表達(dá)在48h較那他霉素組顯著降低(P0.05)。那他霉素+雙醋瑞因組MMP-9的表達(dá)在48h和96h較單純模型組顯著降低(P0.05)。那他霉素+雙醋瑞因組MMP-13的表達(dá)在120h較單純模型組顯著降低(P0.05)。那他霉素組和那他霉素+雙醋瑞因組MMPs的活性在48h、72h和120h較單純模型組顯著降低(P0.05);那他霉素+雙醋瑞因組MMPs的活性在48h和72h較那他霉素組顯著降低(P0.05)。結(jié)論雙醋瑞因滴眼液在真菌角膜炎中可以減少IL-1和IL-6的分泌,通過(guò)抑制MIP-2和ICAM-1的表達(dá),減少中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn),從而抑制MMPs表達(dá)及其活性,減少膠原的降解,減輕真菌性角膜炎炎癥反應(yīng)對(duì)角膜造成的損傷。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R77
【部分圖文】：

據(jù)處理PSS21.0 及 Microsoft Excel2010 軟件分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線采用簡(jiǎn)單線性回歸分析；采用獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)對(duì)各時(shí)異比較，P< 0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組的不同時(shí)間差素方差分析，若方差齊則采用 LSD 檢驗(yàn)，若方差不齊則采用 ，P< 0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分析采用 DA件。醋瑞因給藥后在角膜中轉(zhuǎn)化為大黃酸

表 1 2%雙醋瑞因滴眼液多次與單次給藥的角膜內(nèi)藥物濃度（n=6）時(shí)間多次給藥μg/g單次給藥μg/g5 min 318.67 ± 40.88** 145.17±19.2915 min 210.02 ± 25.66**##97.95 ± 10.49#30 min 188.83 ± 31.74**##71.18 ± 18.70##60 min 112.24 ± 11.70**##39.11 ± 2.44##120 min 90.28 ± 22.01**##18.10 ± 2.34##180 min 57.67 ± 13.71**##9.08 ± 2.04##與單次滴眼相比，**P< 0.01，與 5min 相比，#P< 0.05，##P< 0.01

圖 1 不同時(shí)間點(diǎn)各組小鼠眼球裂隙燈下的大體表現(xiàn)，單純模型組 18h、36h、48h、72h、96h、120h、168h（A-G），那他霉素組 18h、36h、48h、72h、96h、120h、168h（H-N），那他霉素+雙醋瑞因組 18h、36h、48h、72h、96h、120h、168h（O-U）
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