背景后發(fā)性白內(nèi)障(Posterior capsular opacification,PCO)是白內(nèi)障晶體囊外摘除術(shù)后最常見的并發(fā)癥,是術(shù)后視力再次障礙的主要原因。PCO主要病理特征是殘留晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)生增殖、遷移、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、膠原沉積及晶狀體纖維再生等。目前,手術(shù)方式的提高及人工晶體材料和設(shè)計(jì)的改進(jìn)可以改善術(shù)后PCO的發(fā)生,但PCO的發(fā)生率并沒有大幅度降低�，F(xiàn)階段治療PCO唯一有效手段是Nd:YAG激光治療,這種方法不僅治療費(fèi)用昂貴,且術(shù)后導(dǎo)致多種并發(fā)癥,如晶體損傷、視網(wǎng)膜脫落、囊狀黃斑水腫、眼內(nèi)炎、角膜水腫、眼壓升高、晶狀體脫位或半脫位、晶狀體凹陷等。目前,并沒有治療或預(yù)防PCO的藥物安全應(yīng)用于臨床試驗(yàn)。我們研究發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)特異性抑制劑17AAG能夠抑制晶狀體上皮細(xì)胞系增殖。HSP90是一種ATP依賴性分子伴侶,在蛋白穩(wěn)定和降解中起著重要作用,抑制HSP90功能導(dǎo)致其靶蛋白降解。17AAG是HSP90 N端抑制劑,能抑制HSP90和ATP的結(jié)合,從而抑制HSP90 ATP酶的活性,現(xiàn)處于臨床II期研究。EGFR是HSP90的靶向蛋白,EGFR信號(hào)通路受HSP90調(diào)控,17AAG能通過促進(jìn)EGFR降解抑制其下游通路從而抑制細(xì)胞增殖。晶狀體上皮細(xì)胞系是研究PCO最簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?但未考慮細(xì)胞粘附在晶狀體囊膜上的影響,未能真實(shí)反映PCO病理生理上的變化。因此,我們制備體外大鼠PCO囊袋模型和體內(nèi)兔PCO模型,以探討HSP90特異性抑制劑17AAG對(duì)后發(fā)性白內(nèi)障的抑制作用及分子機(jī)制。目的探討HSP90特異性抑制劑17AAG對(duì)后發(fā)性白內(nèi)障的抑制作用及分子機(jī)制。方法1.制備體外大鼠晶狀體PCO囊袋模型,通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)無血清培養(yǎng)6h、12h、24h時(shí)和正常組織上皮細(xì)胞中HSP90、EGFR、p-ERK的表達(dá)量。2.使用小鼠晶狀體上皮細(xì)胞系(m LEC)和人晶狀體上皮細(xì)胞系(SRA01/04、HLE-B3),通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)17AAG對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響。3.制備大鼠PCO囊袋模型,通過培養(yǎng)和倒置顯微鏡觀察,檢測(cè)17AAG對(duì)囊袋殘留上皮細(xì)胞增殖的影響,并通過Ed U標(biāo)記法驗(yàn)證其作用效果。4.制備大鼠PCO囊袋模型,通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)17AAG對(duì)囊袋殘留上皮細(xì)胞中EGFR及下游通路表達(dá)的影響。5.制備大鼠PCO囊袋模型,通過TUNEL染色法和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)17AAG是否誘導(dǎo)囊袋上皮細(xì)胞凋亡。6.制備大鼠PCO囊袋模型,通過培養(yǎng)和倒置顯微鏡觀察,比較17AAG和HSP90非N端抑制劑PEITC對(duì)囊袋殘留上皮細(xì)胞增殖的影響,并通過Ed U標(biāo)記法驗(yàn)證其作用效果。7.構(gòu)建兔體內(nèi)PCO模型,檢測(cè)17AAG對(duì)兔體內(nèi)PCO發(fā)生的影響。結(jié)果1.大鼠晶狀體囊袋殘留上皮細(xì)胞高表達(dá)HSP90,EGFR信號(hào)通路激活。2.17AAG抑制晶狀體上皮細(xì)胞系增殖,且有時(shí)間和濃度依賴性。3.17AAG抑制大鼠PCO囊袋模型組織上殘留上皮細(xì)胞增殖。4.17AAG促進(jìn)囊袋殘留上皮細(xì)胞中EGFR降解并抑制其下游通路。5.17AAG誘導(dǎo)大鼠晶狀體PCO囊袋上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡。6.HSP90非N端抑制劑PEITC不抑制大鼠晶狀體囊袋殘留上皮細(xì)胞增殖。7.17AAG延遲兔體內(nèi)PCO的發(fā)生。結(jié)論1.PCO發(fā)生中HSP90表達(dá)升高,EGFR信號(hào)通路上調(diào),并參與囊袋殘留上皮細(xì)胞增生。2.17AAG通過抑制HSP90-EGFR信號(hào)通路抑制大鼠囊袋殘留上皮細(xì)胞增殖和兔PCO發(fā)生。3.HSP90是預(yù)防PCO的一個(gè)新的靶向分子。
【學(xué)位單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R776.1
【部分圖文】：

晶體囊袋殘留的晶狀體上皮細(xì)等覆蓋晶體后囊膜所造成的[4]。首先在鏡下，分離出大鼠晶狀體，經(jīng)過在前囊培養(yǎng)囊袋組織。我們選取正常晶狀體囊袋模型組織，通過免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，1）。另外，我們發(fā)現(xiàn)HSP90的靶向蛋白達(dá)量也明顯升高。賴性的熱休克蛋白，具有分子伴侶功能作為腫瘤防治研究中的一個(gè)重要的藥制HSP90分子伴侶的功能，且作為抗腫特異性抑制劑17AAG對(duì)PCO的影響。

由于細(xì)胞的增殖能力和生存能力較強(qiáng)，采用細(xì)胞系研究是一種普遍和簡(jiǎn)單的方式，因此，我們首先使用細(xì)胞系模型通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)17AAG對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，0μM 、0.1μM 、0.2μM、0.4μM和0.8μM的17AAG分別處理鼠晶狀體上皮細(xì)胞（mLEC）24h、48h和72h，隨著加藥濃度的升高，細(xì)胞增殖明顯受到抑制，呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系（圖A、B、C）。通過SPSS進(jìn)行概率回歸分析，17AAG處理24h、48h和72h對(duì)于mLEC的半數(shù)抑制濃度IC50分別為0.849μM（p=0.001<0.150）、0.489μM（p=0.09<0.150）、0.491μM（p=0.001<0.150）。根據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們選取0.4μM濃度17AAG分別處理mLEC、SRA01/04和HLE-B3三種細(xì)胞0h、24h、48h和72h，隨著加藥時(shí)間升高，細(xì)胞增殖明顯受到抑制，呈明顯時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系（圖D、E、F）。因此，17AAG能抑制鼠晶狀體上皮細(xì)胞（mLEC）和人晶狀體上皮細(xì)胞（SRA01/04和HLE-B3）增殖，并且隨著17AAG加藥濃度升高或加藥時(shí)間增加，細(xì)胞增殖抑制率明顯增加。

20圖 2.3.1.1 不同濃度 17AAG 對(duì)大鼠晶狀體囊袋殘留上皮細(xì)胞增殖的影響。（A、E、H 和 K）為不同濃度 17AAG 處理囊袋第一天。（B、F、I、L）為不同濃度 17AAG 處理囊袋第二天。（C、G、J、M）為不同濃度 17AAG 處理囊袋第三天。圖 A、B、C 為 0μM 17AAG 處理，圖 E、F、G 為 0.2μM17AAG 處理，圖 H、I、J 為 0.4μM 17AAG 處理，圖 K、J、M 為 0.8μM 17AAG 處理。其中 A-C 和E-M 標(biāo)尺為 500μm ，D 圖為 C 圖中黑框的放大圖，標(biāo)尺為 200μm。圖中黑色小箭頭指的是細(xì)胞邊緣。

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4 姜良柱;吳明星;;后發(fā)性白內(nèi)障評(píng)價(jià)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)用眼科雜志;2006年06期

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7 盧海萍，張?jiān)?后發(fā)性白內(nèi)障手術(shù)的改進(jìn)[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年02期

8 夏小平;陸道炎;;后發(fā)性白內(nèi)障[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè);1992年01期

9 劉平,孔令坤,丁淑云,王曉丹;Nd:YAG激光治療后發(fā)性白內(nèi)障[J];光電子·激光;1993年03期

10 彭星稀,蔣幼芹;釹—YAG激光治療外傷性后發(fā)性白內(nèi)障40眼分析[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志(附眼科手術(shù));1988年04期

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10 林磊;趙云娥;李瑾;常平駿;喻芳;鄭虔;;囊袋張力環(huán)對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞及后發(fā)性白內(nèi)障的影響[A];2014浙江省眼科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2014年

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本文編號(hào)：2816492