【摘要】：研究目的探究甲基化抑制劑zebularine對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)變化,基因表達(dá)改變以及DNA甲基化程度的改變,為糖尿病視網(wǎng)膜病變的診療提供新的思路和方法。方法1.應(yīng)用鼠尾靜脈注射鏈脲霉素(streptozotocin,STZ)構(gòu)建S-D糖尿病大鼠模型。2將48只雄性SD大鼠分為6組:正常對(duì)照組,STZ糖尿病大鼠組,zebularine100uM組,zebularine 200uM組,zebularine 400uM組,lucentis組,各組8只。利用投射電鏡技術(shù)觀察各組視網(wǎng)膜各層亞結(jié)構(gòu)的變化,HE染色觀察各組視網(wǎng)膜細(xì)胞組織的形態(tài),免疫熒光mecp2、5-mC兩種抗體探查各組視網(wǎng)膜DNA甲基化程度,RT-PCR檢測(cè)各組與生物學(xué)行為相關(guān)基因的表達(dá)差異,采用亞硫酸氫鈉測(cè)序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)檢測(cè)各組ppar-γ的啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化程度。3.利用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間比較采用單因素方差分析,組內(nèi)比較使用單樣本t檢驗(yàn),P0.05則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.透射電鏡結(jié)果顯示:單純STZ造模組與正常對(duì)照組相比較,細(xì)微結(jié)構(gòu)遭到破壞,如:視錐細(xì)胞的溶解以及bruch膜的斷裂等等,而注射zebularine的STZ大鼠的細(xì)微結(jié)構(gòu)要好于單純?cè)炷＝M。2.HE染色結(jié)果顯示:單純STZ造模組的視網(wǎng)膜可見視錐視桿細(xì)胞排列紊亂,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層空泡樣改變,視網(wǎng)膜固縮等改變,而zebularine作用于糖尿病大鼠組可見細(xì)胞排列紊亂和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞空泡狀改變有所改善。3.免疫熒光結(jié)果顯示:單純STZ造模組vegfa、txnip、snail1、N-cadherine的表達(dá)較正常組有明顯的升高(p=0.0007,p=0.0006,p=0.0055,p=0.0001),而zebularine作用下的STZ大鼠各基因的表達(dá)較正常組并未明顯升高,較單純STZ誘導(dǎo)組來說,表達(dá)明顯降低(p=0.0017,p=0.0018,p=0.0148,p=0.0052)。單純STZ造模組的sirt1、PPAR-γ的表達(dá)較正常組明顯降低(p=0.0041,p=0.0002),而zebularine作用下的sirt1、PPAR-γ的表達(dá)量在視網(wǎng)膜中有所升高,并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.0055 p=0.0020)。5.亞硫酸氫鈉測(cè)序結(jié)果顯示:zebularine作用下的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜PPAR-γ相應(yīng)位點(diǎn)的DNA甲基化程度明顯降低,且接近于正常水平,與STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠組相比,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.0224),而與正常對(duì)照組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論1.zebularine玻璃體腔注射可改善糖尿病視網(wǎng)膜病變?cè)斐傻男螒B(tài)改變。2.zebularine可以使糖尿病大鼠的vegfa、txnip、snail1、N-cadherine表達(dá)量降低,sirt11、PPAR-γ的表達(dá)量升高,可能通過抗炎等途徑改善疾病的進(jìn)展。3.zebularine使得糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中PPAR-γ啟動(dòng)子區(qū)域的CPG島甲基化程度降低,提示利用zebularine治療糖尿病視網(wǎng)膜病變具有潛在的可能性。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1
【圖文】：

圖 1 糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠體重變化趨勢(shì)圖normalstznormalstznormalstznormalstznormalstznormalstznormalstznormalstz010203040Bloodsugar(mM)0d3d6d12d24d34d44d54d圖 2 糖尿病大鼠血糖變化趨勢(shì)圖大鼠的血糖在造模后 3 天開始升高，之后血糖數(shù)始終高于 16.到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，正常組大鼠的血糖則一直保持在正常范圍之內(nèi)血糖的癥狀出現(xiàn)，造模組和正常組之間的血糖數(shù)具有明顯的

圖 3 各組糖尿病大鼠并發(fā)白內(nèi)障發(fā)病率百分?jǐn)?shù)大鼠普遍有角膜斑翳以及白內(nèi)障等并發(fā)癥的出到玻璃體腔內(nèi)，隨著濃度的增高，大鼠白內(nèi)障統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。膜，脈絡(luò)膜血管擴(kuò)張充分，未見狹窄和閉塞；列整齊；部分視錐細(xì)胞出現(xiàn)固縮。

圖 3 各組糖尿病大鼠并發(fā)白內(nèi)障發(fā)病率百分?jǐn)?shù)雖然糖尿病大鼠普遍有角膜斑翳以及白內(nèi)障等并發(fā)癥的出現(xiàn)，但不同濃度的 zebularine 注射到玻璃體腔內(nèi)，隨著濃度的增高，大鼠白內(nèi)障的發(fā)病率呈降低趨勢(shì)，且數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.2.2 透射電鏡正常組視網(wǎng)膜，脈絡(luò)膜血管擴(kuò)張充分，未見狹窄和閉塞；Bruch 膜厚度較均勻；外節(jié)細(xì)胞排列整齊；部分視錐細(xì)胞出現(xiàn)固縮。

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