【摘要】：目的:研究氫氣水滴眼對堿燒傷誘導的大鼠角膜新生血管的抑制作用,通過檢測在氫氣水干預條件下角膜及房水組織中腫瘤壞死因子α和色素上皮衍生因子PEDF的變化,探討角膜病理性血管形成的相關機制。方法:1.選取SPF級,6-8周齡,體重(180±20)g雄性SD大鼠,均將右眼作為實驗眼。2.制作堿燒傷誘導的角膜新生血管模型,成功建立48眼,將其按隨機化原則進行分組,分為陰性對照組、陽性對照組和治療組。3.陰性對照組給予生理鹽水滴眼,陽性對照組給予妥布霉素地塞米松眼液滴眼,治療組給予1.6PPM(part per million)氫氣水滴眼。均為每次一滴,每日四次,持續(xù)14天。4.在模型建立后,采用裂隙燈顯微鏡分別觀察第1天、第3天、第7天和第14天的角膜基本情況,拍照后使用Digimizer Image Analysis軟件測量并記錄新生血管長度,計算新生血管生長面積。5.在堿燒傷后第14天,水合氯醛腹腔麻醉,在無菌條件下取大鼠角膜組織并抽取房水。6.蘇木精-伊紅染色技術觀察角膜組織病理學變化;7.免疫組織化學染色技術檢測角膜組織色素上皮衍生因子PEDF蛋白表達。8.實時熒光定量PCR技術檢測角膜組織色素上皮衍生因子PEDF m RNA含量。9.酶聯(lián)免疫吸附測定技術檢測房水內腫瘤壞死因子TNF-α蛋白含量。結果:1.堿燒傷后第3、7天和14天,陰性對照組新生血管面積分別為(9.49±2.79)mm2、(17.71±4.06)mm2和(25.35±1.40)mm2;陽性對照組新生血管面積分別為(4.27±2.68)mm2、(6.44±4.67)mm2和(15.98±4.75)mm2;治療組新生血管面積分別為(3.26±1.82)mm2、(8.59±3.98)mm2和(3.24±2.34)mm2;在第3、7和14天,治療組和陽性對照組血管面積均小于陰性對照組,差異均有顯著統(tǒng)計學意義(均為P0.01);堿燒傷第3天,雖然治療組新生血管面積小于陽性對照組,但相差不大,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);堿燒傷第7天,雖然治療組血管面積大于陽性對照組,但相差仍然較小,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);在堿燒傷后第14天,治療組血管面積明顯小于陽性對照組,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。2.堿燒傷第14天,HE常規(guī)染色及免疫組織化學染色結果提示:治療組角膜組織中PEDF蛋白表達較陽性對照組和陰性對照組明顯增強,基質層新生血管極少;3.堿燒傷第14天,實時熒光定量PCR結果提示:治療組角膜組織中PEDF m RNA含量明顯高于陽性對照組和陰性對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(均為P0.01);4.堿燒傷第14天,酶聯(lián)免疫吸附測定結果提示:治療組房水中TNF-α蛋白含量明顯低于陽性對照組與陰性對照組,差異均有顯著統(tǒng)計學意義(均為P0.01)。結論:采用1.6 PPM氫氣水滴眼,能夠通過調控腫瘤壞死因子TNF-α,上調色素上皮衍生因子PEDF在眼內的表達,繼而有效抑制堿燒傷誘導的大鼠角膜新生血管。
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R779.1
【圖文】：

生血管芽生長，角膜呈灰白色渾濁，上皮部分融解缺損，基質層水腫均可見皺褶，前房可見浮游物，但未見明顯積血，瞳孔視不清。堿燒傷后第 3 天，各組可見新生血管已出芽，并由周邊角膜緣向角陰性對照組中，可見血管生長致密，長而粗，較整齊，呈毛刷狀，相互暗紅，但未達角膜中央，累及面積達到 1/2，角膜基質層水腫明顯，部分陽性對照組與治療組僅在血管床周圍發(fā)現局灶性血管芽，短而細，分布對照組中，有部分角膜上皮中央區(qū)出現大面積溶解脫落（圖 1）。堿燒傷后第 7 天，在陰性對照組中，毛細血管生長達到高峰期，密集交織成網，角膜上皮缺失部分已基本愈合；陽性對照組與治療組血管生較細；治療組角膜上皮已逐漸透明；陽性對照組中角膜中央區(qū)仍可見溶堿燒傷后第 14 天，在陰性對照組中，毛細血管呈圓周生長，已蔓粗大致密，全角膜呈瓷白色渾濁；陽性對照組可見血管床附近小血管有熟血管仍繼續(xù)向角膜中央生長，累及面積達 1/2 以上，角膜中央區(qū)變薄療組中，血管床附近細小血管已基本退化，成熟血管短而細，分布稀疏漸透明（圖 3）。

圖 2 大鼠角膜堿燒傷第 7 天 CNV 照片。A 陰性對照組 B 陽性對照組 C 治療組A B C圖 3 大鼠角膜堿燒傷第 14 天 CNV 照片。A 陰性對照組 B 陽性對照組 C 治療組3.2 角膜新生血管面積計算結果堿燒傷后第 3、7 天和 14 天，陰性對照組新生血管面積分別為（9.4（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；陽性對照組新生血管面積2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治療組新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。

圖 3 大鼠角膜堿燒傷第 14 天 CNV 照片。A 陰性對照組 B 陽性對照組 C 治療組3.2 角膜新生血管面積計算結果堿燒傷后第 3、7 天和 14 天，陰性對照組新生血管面積分別為（9（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；陽性對照組新生血管面積2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治療組新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。表 1 大鼠 角膜堿燒傷誘導不同時間點 3 組 CNV 面積（x分組 3d 7d 陰性對照組9.49±2.79 17.71±4.06 25.3陽性對照組4.27±2.68* 6.44±4.67* 15.9治療組3.26±1.82* 8.59±3.98* 3.2注：與陰性對照組相比，*P＜0.01；與陽性對照組相比，△P＜0.01

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 齊林嵩;張作明;張磊;;氫氣眼科醫(yī)學研究進展[J];中華實驗眼科雜志;2014年11期

相關博士學位論文 前1條

1 孫強;氫氣生物學效應系列研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

本文編號：2779409