【摘要】：背景近年來放療、化療、免疫治療以及外科手術(shù)已廣泛應(yīng)用于頭頸癌的臨床治療中,但由于癌細(xì)胞容易轉(zhuǎn)移,頭頸部惡性腫瘤的治療效果仍不理想。其中,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中的重要一環(huán)。TRPP2(瞬時電位通道)信號通路已經(jīng)被證明可以通過調(diào)節(jié)喉鱗狀細(xì)胞癌的EMT(上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變)過程來增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲與遷移。這一發(fā)現(xiàn)為腫瘤的臨床治療提供了新的思路。目的探討外泌體/TRPP2 siRNA復(fù)合物是否可以通過抑制TRPP2表達(dá)來影響FaDu(人咽鱗癌細(xì)胞)細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變過程。方法1.外泌體與TRPP2 siRNA結(jié)合使用外泌體提取液和高速離心的方法提取人胚腎293細(xì)胞(HEK-293)外泌體,用瓊脂凝膠電泳法檢測TRPP2 siRNA與外泌體是否穩(wěn)定結(jié)合。2.觀察外泌體/TRPP2 siRNA復(fù)合物在FaDu細(xì)胞中的分布使用熒光顯微鏡觀察被熒光染料標(biāo)記的外泌體及TRPP2 siRNA,以確定外泌體/TRPP2 siRNA復(fù)合物是否被FaDu細(xì)胞攝取。3.檢測TRPP2、vimentin、N-cadherin和E-cadherin蛋白在被外泌體/TRPP2siRNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染后的FaDu細(xì)胞中的表達(dá)使用Western blotting的方法檢測TRPP2,vimentin,N-cadherin和E-cadherin蛋白的表達(dá)水平,以確定轉(zhuǎn)染后的FaDu細(xì)胞的TPRR2通道及EMT過程是否受到影響。結(jié)果1.外泌體能與TPRR2 siRNA穩(wěn)定結(jié)合。2.外泌體/TRPP2 siRNA復(fù)合物能被FaDu細(xì)胞大量攝取。3.外泌體/TRPP2 siRNA復(fù)合物能使轉(zhuǎn)染的FaDu細(xì)胞EMT過程減弱。結(jié)論外泌體/TRPP2 siRNA復(fù)合物可以被FaDu細(xì)胞攝取并顯著影響其TRPP2表達(dá)和EMT過程,外泌體/TRPP2 siRNA復(fù)合物有望成為頭頸腫瘤治療的新的方向。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.63
【圖文】：

組為無外泌體包裹的 TRPP2 siRNA,孵育后行瓊脂凝膠電泳，結(jié)果顯示D）不含外泌體的 TRPP2 siRNA 在 5 分鐘內(nèi)即被核酸酶及小鼠血清中其解，但外泌體/TRPP2 siRNA 復(fù)合物顯示的條帶強(qiáng)度并在 120 分鐘內(nèi)并此可以證明外泌體可以包裹 TRPP2 siRNA 使其免于核酸酶的降解，增siRNA 在體內(nèi)的穩(wěn)定性。

213.5 外泌體/TRPP2 siRNA 復(fù)合物提高了 FaDu 細(xì)胞中 TRPP2 蛋白的表達(dá)TRPP2 是由 PKD2 基因編碼的非選擇性陽離子通道，在許多細(xì)胞過程中起著重要作用。我們以前的研究表明 TRPP2 表達(dá)水平在人喉鱗細(xì)胞癌中顯著增加，并且可通過抑制 TRPP2 影響喉鱗癌細(xì)胞 EMT 過程。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)外泌體在體圖 2. 外泌體/TRPP2 siRNA 復(fù)合物 在 FaDu 細(xì)胞內(nèi)的分部

外將 TRPP2 siRNA 遞送到 FaDu 細(xì)胞中，但 TRPP2 siRNA 是否實(shí)現(xiàn) TRPP2 特異性基因沉默是未知的。因此，我們接下來使用蛋白質(zhì)印跡分析來評估轉(zhuǎn)染后 FaDu 細(xì)胞中 TRPP2 的表達(dá)水平，以證明外泌體運(yùn)載的 TRPP2 siRNA 是否發(fā)揮了作用。如（圖3，A，B）顯示，轉(zhuǎn)染外泌體/TRPP2 siRNA 復(fù)合物的 FaDu 細(xì)胞，TRPP2 蛋白的表達(dá)水平遠(yuǎn)低于無外泌體包裹的 TRPP2 siRNA 轉(zhuǎn)染的對照組。因此，我們的發(fā)現(xiàn)不僅表明外泌體成功地將完整的 TRPP2 siRNA 遞送至 FaDu 細(xì)胞，而且還表明了 TRPP2siRNA 顯著抑制 FaDu 細(xì)胞中的 TRPP2 表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Jian Zhang;Sha Li;Lu Li;Meng Li;Chongye Guo;Jun Yao;Shuangli Mi;;Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2015年01期

本文編號：2752340