發(fā)布時間：2020-06-21 03:07

【摘要】：目的TGF-β1/Smad信號通路是鞏膜重塑的重要信號通路之一,Smurf2(Smad ubiquitination regulatory factor)是TGF-β1/Smad信號通路中的樞紐蛋白。本研究探討Smurf2在人胚胎眼鞏膜成纖維細胞(Human fetal scleral fibroblasts,HFSFs細胞)中表達,及TGF-β1作用下HFSFs細胞中Smurf2和效應蛋白COL1A1含量的變化,以期闡明TGF-β1對HFSFs細胞Smurf2通路的作用。方法HFSFs細胞復蘇并穩(wěn)定傳代后,用免疫細胞化學法檢測細胞中Smurf2蛋白的表達;分別用不同濃度TGF-β1(0ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)處理HFSF細胞24h以及10ng/ml TGF-β1處理HFSFs細胞不同時長(1h、6h、12h、24h)后,用實時熒光定量法檢測各組Smurf2 mRNA和COL1A1 mRNA表達水平;用蛋白免疫印跡(Western-Blot)法檢測各組Smurf蛋白2和COL1A1蛋白的表達水平。結果1.Smurf2在HFSFs細胞的表達:免疫細胞化學檢測的結果顯示HFSFs細胞中有Smurf2蛋白的表達;2.不同濃度TGF-β1干預對HFSFs細胞Smurf2和CoL1A1表達的影響:5 ng/ml、10 ng/mlTGF-β1干預組Smurf2 mRNA表達上調(P=0.002、0.028)。1ng/ml和5 ng/mlTGF-β1干預組Smurf2蛋白表達上調(P=0.011、0.037)。其中,10 ng/ml TGF-β1干預組COL1A1 mRNA和蛋白表達顯著升高(P0.01)。3.不同時長TGF-β1干預HFSFs細胞Smurf2和CoL1A1表達的影響:10 ng/ml TGF-β1共培養(yǎng)HFSFs細胞1h、6h、12h、24h后,COL1A1 mRNA 24h干預組表達顯著升高(P=0.033);COL1A1蛋白表達改變呈先增加后降低趨勢,6h組COL1A1蛋白表達顯著升高(P=0.003),12h表達呈下降趨勢(P=0.121),24h組表達有所回升(P=0.017)。Smurf2 mRNA和蛋白表達改變呈先增加后降低趨勢,6h組Smurf2 mRNA和蛋白的表達升到最高(P=0.024、0.044);而在24h下降至與未刺激無顯著差異(P=0.750,0.05)。結論1.Smurf2蛋白在HFSFs細胞中有表達。2.10ng/mlTGF-β1干預早期促進Smurf2mRNA和蛋白的表達,可有效誘導HFSFs細胞I型膠原的合成。3.Smurf2蛋白可能參與調控HFSFs細胞中TGF-β1/Smad信號通路的調控。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R778.11
【圖文】：

圖 1.1. HFSFs 細胞空白對照組 圖 1.2. HFSFs 細胞 Smurf2 抗體組圖 1.3.ARPE-19 細胞空白對照組 圖 1.4.ARPE-19 細胞 Smurf2 抗體組2.不同濃度 TGF-β1 干預對 HFSFs 細胞 COL1A1 表達的影響（1）實時熒光定量PCR檢測結果：不同濃度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、5 ng/m10 ng/ml）處理 HFSFs 細胞 24h 后：COL1A1 mRNA 的相對表達量分別為 1±0.02

圖 1.1. HFSFs 細胞空白對照組 圖 1.2. HFSFs 細胞 Smurf2 抗體組圖 1.3.ARPE-19 細胞空白對照組 圖 1.4.ARPE-19 細胞 Smurf2 抗體組2.不同濃度 TGF-β1 干預對 HFSFs 細胞 COL1A1 表達的影響（1）實時熒光定量PCR檢測結果：不同濃度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、5 ng/m10 ng/ml）處理 HFSFs 細胞 24h 后：COL1A1 mRNA 的相對表達量分別為 1±0.02

【參考文獻】

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本文編號：2723406