【摘要】：目的TGF-β1/Smad信號(hào)通路是鞏膜重塑的重要信號(hào)通路之一,Smurf2(Smad ubiquitination regulatory factor)是TGF-β1/Smad信號(hào)通路中的樞紐蛋白。本研究探討Smurf2在人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞(Human fetal scleral fibroblasts,HFSFs細(xì)胞)中表達(dá),及TGF-β1作用下HFSFs細(xì)胞中Smurf2和效應(yīng)蛋白COL1A1含量的變化,以期闡明TGF-β1對(duì)HFSFs細(xì)胞Smurf2通路的作用。方法HFSFs細(xì)胞復(fù)蘇并穩(wěn)定傳代后,用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞中Smurf2蛋白的表達(dá);分別用不同濃度TGF-β1(0ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)處理HFSF細(xì)胞24h以及10ng/ml TGF-β1處理HFSFs細(xì)胞不同時(shí)長(zhǎng)(1h、6h、12h、24h)后,用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)各組Smurf2 mRNA和COL1A1 mRNA表達(dá)水平;用蛋白免疫印跡(Western-Blot)法檢測(cè)各組Smurf蛋白2和COL1A1蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果1.Smurf2在HFSFs細(xì)胞的表達(dá):免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)的結(jié)果顯示HFSFs細(xì)胞中有Smurf2蛋白的表達(dá);2.不同濃度TGF-β1干預(yù)對(duì)HFSFs細(xì)胞Smurf2和CoL1A1表達(dá)的影響:5 ng/ml、10 ng/mlTGF-β1干預(yù)組Smurf2 mRNA表達(dá)上調(diào)(P=0.002、0.028)。1ng/ml和5 ng/mlTGF-β1干預(yù)組Smurf2蛋白表達(dá)上調(diào)(P=0.011、0.037)。其中,10 ng/ml TGF-β1干預(yù)組COL1A1 mRNA和蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01)。3.不同時(shí)長(zhǎng)TGF-β1干預(yù)HFSFs細(xì)胞Smurf2和CoL1A1表達(dá)的影響:10 ng/ml TGF-β1共培養(yǎng)HFSFs細(xì)胞1h、6h、12h、24h后,COL1A1 mRNA 24h干預(yù)組表達(dá)顯著升高(P=0.033);COL1A1蛋白表達(dá)改變呈先增加后降低趨勢(shì),6h組COL1A1蛋白表達(dá)顯著升高(P=0.003),12h表達(dá)呈下降趨勢(shì)(P=0.121),24h組表達(dá)有所回升(P=0.017)。Smurf2 mRNA和蛋白表達(dá)改變呈先增加后降低趨勢(shì),6h組Smurf2 mRNA和蛋白的表達(dá)升到最高(P=0.024、0.044);而在24h下降至與未刺激無(wú)顯著差異(P=0.750,0.05)。結(jié)論1.Smurf2蛋白在HFSFs細(xì)胞中有表達(dá)。2.10ng/mlTGF-β1干預(yù)早期促進(jìn)Smurf2mRNA和蛋白的表達(dá),可有效誘導(dǎo)HFSFs細(xì)胞I型膠原的合成。3.Smurf2蛋白可能參與調(diào)控HFSFs細(xì)胞中TGF-β1/Smad信號(hào)通路的調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R778.11
【圖文】：

圖 1.1. HFSFs 細(xì)胞空白對(duì)照組 圖 1.2. HFSFs 細(xì)胞 Smurf2 抗體組圖 1.3.ARPE-19 細(xì)胞空白對(duì)照組 圖 1.4.ARPE-19 細(xì)胞 Smurf2 抗體組2.不同濃度 TGF-β1 干預(yù)對(duì) HFSFs 細(xì)胞 COL1A1 表達(dá)的影響（1）實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果：不同濃度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、5 ng/m10 ng/ml）處理 HFSFs 細(xì)胞 24h 后：COL1A1 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量分別為 1±0.02

圖 1.1. HFSFs 細(xì)胞空白對(duì)照組 圖 1.2. HFSFs 細(xì)胞 Smurf2 抗體組圖 1.3.ARPE-19 細(xì)胞空白對(duì)照組 圖 1.4.ARPE-19 細(xì)胞 Smurf2 抗體組2.不同濃度 TGF-β1 干預(yù)對(duì) HFSFs 細(xì)胞 COL1A1 表達(dá)的影響（1）實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果：不同濃度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、5 ng/m10 ng/ml）處理 HFSFs 細(xì)胞 24h 后：COL1A1 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量分別為 1±0.02

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2723406