【摘要】：一、應(yīng)用FP I建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型 目的應(yīng)用液壓沖擊顱腦損傷儀建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型。方法應(yīng)用液壓沖擊顱腦損傷儀(FPI)建立兔外傷性視神經(jīng)病變模型。將兔分為正常對(duì)照組和損傷后1d、7d、14d、28d亞組,每組各8只。觀察損傷后不同時(shí)間點(diǎn)視覺誘發(fā)電位及視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果(1)對(duì)照組視網(wǎng)膜及脈絡(luò)膜結(jié)構(gòu)良好,層次清晰,RGC呈單層排列,整齊密集,胞核清楚,核膜光滑完整；視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)變薄,細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,RGCs出現(xiàn)核固縮,染色加深,排列稀疏,逐漸出現(xiàn)空化RGCs。(2)正常對(duì)照組視覺誘發(fā)電位檢查均引出典型的N75-Ploo-N135曲線,潛伏期和振幅分別為(41.63±4.89)ms和(9.12±2.97)μv；視神經(jīng)損傷后1d Ploo波潛伏期延長,波幅降低,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),傷后潛伏期逐步延長,波幅降低。結(jié)論應(yīng)用FPI成功建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型,為外傷性視神經(jīng)病變發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究奠定良好基礎(chǔ)。 二、晶狀體損傷促進(jìn)兔外傷性視神經(jīng)病變RGCs軸突再生作用及機(jī)制 目的探討晶狀體損傷促進(jìn)外傷性視神經(jīng)病變RGCs軸突再生的作用及機(jī)制。方法選取128只中國白兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組各64只,每組按照不同觀察時(shí)間點(diǎn)(1、2、4、7、10、14、21、28d)分為8個(gè)亞組。每亞組8只。應(yīng)用FPI建立右眼外傷性視神經(jīng)病變模型,實(shí)驗(yàn)組損傷右眼晶狀體,對(duì)照組不損傷右眼晶狀體。于損傷前及損傷后1、2、4、7、10、14、21、28d行F-VEP檢查并進(jìn)行比較,并于上述各時(shí)間點(diǎn)制作視網(wǎng)膜切片,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)視網(wǎng)膜中巨噬細(xì)胞的數(shù)量,用焦油紫染色標(biāo)記存活的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs),對(duì)存活的RGCs進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組,視神經(jīng)損傷后1天,F-VEP主波P100潛伏期延長,振幅降低,10天時(shí)潛伏期最長,隨后潛伏期逐漸縮短,振幅7天時(shí)最低,隨后振幅逐漸升高；在對(duì)照組,視神經(jīng)損傷后P100潛伏期逐漸延長,振幅逐漸降低。在實(shí)驗(yàn)組,鐵染色標(biāo)記陽性的活化巨噬細(xì)胞在在視神經(jīng)損傷后4天視網(wǎng)膜內(nèi)檢測(cè)到,軸突再生的RGCs損傷后7天檢測(cè)；而在對(duì)照組,始終沒有檢測(cè)到鐵染色標(biāo)記陽性的活化巨噬細(xì)胞和軸突再生的RGCs。結(jié)論晶狀體損傷可促進(jìn)外傷性視神經(jīng)病變RGCs軸突再生,活化的巨噬細(xì)胞在其中起著重要作用。 三、Z-DEVD-FMK對(duì)兔外傷性視神經(jīng)病變RGCs的保護(hù)作用 目的觀察Z-DEVD-FMK對(duì)免外傷性視神經(jīng)病變視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。方法健康中國白兔104只,隨機(jī)選取8只兔作為空白對(duì)照組(N組),其余96只作為實(shí)驗(yàn)組,分為玻璃體腔注射組和眼周注射組,每組48只。玻璃體腔注射組中兔右眼注射Z-DEVD-FMK (A組),左眼注射DMSO液(B組)。眼周注射組中免右眼注射Z-DEVD-FMK (C組),左眼注射DMSO液(D組)。每組又根據(jù)給藥后1d、4d、7d、10d、14d、21d觀察時(shí)間點(diǎn)分為六個(gè)亞組,每個(gè)亞組8只眼。應(yīng)用液壓沖擊顱腦損傷儀(fluid percussion brain injury device, FPI)建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型,分別于損傷后第1d、4d、7d、10d、14d、21d行F-VEP檢查,TUNEL法檢測(cè)RGCs凋亡。結(jié)果(1) F-VEP:給藥后第7d、第10d、第14d和第21d,A組和C組的PIoo潛伏期逐漸縮短,振幅逐漸升高。與B組和D組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。A組和C組主波潛伏期在給藥后第4d雖然仍在延長,但與B組和D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),A組傷后第21天的潛伏期和振幅分別為(64.46±5.92)ms和(6.61±2.61)μv,C組分別為(71.06±5.57)ms和(5.91±1.64)μv,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�？瞻讓�(duì)照組潛伏期和振幅與其他各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)TUNEL染色及RGCs凋亡率：C組和D組在傷后第1天TUNEL染色可見凋亡細(xì)胞,第4天明顯增多,至第7天達(dá)高峰。A組和C組在傷后第4天至第10天僅可見少量凋亡細(xì)胞,在第4天-第21天,與B組、D組比較,RGCs凋亡率明顯減少。結(jié)論Caspase-3抑制劑Z-DEVD-FMK能有效地抑制視神經(jīng)損傷后神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡,在一定程度上促進(jìn)視功能修復(fù)。Z-DEVD-FMK玻璃體腔注射比球周注射作用更加持久。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R774.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2702464