【摘要】：研究背景在全球范圍內(nèi),耳聾是一種最常見的感覺障礙性疾病之一。大約1%o的新生兒或嬰幼兒在學(xué)語前期患有重度或極重度耳聾。耳聾的病因十分復(fù)雜,遺傳因素、環(huán)境因素或二者共同作用可導(dǎo)致耳聾發(fā)生。調(diào)查顯示,超過半數(shù)的極重度的耳聾患者是遺傳因素所導(dǎo)致的,所以耳聾遺傳學(xué)方面的相關(guān)研究是十分重要的課題。遺傳性耳聾可表現(xiàn)為多系統(tǒng)疾病的一個(gè)伴隨癥狀,被稱為綜合征型耳聾；也可表現(xiàn)為只有耳部(和前庭系統(tǒng))疾患,被稱為非綜合征型耳聾。后者是遺傳性耳聾的常見的形式,約占遺傳性耳聾的70%。根據(jù)遺傳方式不同,非綜合征型耳聾又可分為常染色體顯性遺傳(占20%)、常染色體隱性遺傳(占75%)、伴X性染色體遺傳及線粒體(母系)遺傳(占1%-5%)。 遺傳性耳聾具有高度的遺傳異質(zhì)性,目前已有140多個(gè)非綜合征型耳聾基因座位被發(fā)現(xiàn),在這些座位上至少成功鑒定了64個(gè)責(zé)任基因。隨著醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展,基因檢測已經(jīng)成為查找耳聾病因的有效手段之一,基因診斷對耳聾患者及其家庭的臨床評估具有十分重要的意義。耳聾責(zé)任基因鑒定工作是對患者進(jìn)行分子診斷、檢測基因攜帶者及產(chǎn)前診斷的前提之一。也是我們更好的理解潛在蛋白生理功能和疾病發(fā)生機(jī)制的第一步,反過來,這又是有效干預(yù)遺傳性耳聾的起點(diǎn)。 過去的幾十年,單基因病家系的致病基因鑒定主要依靠基因定位候選基因克隆的方法。然而,當(dāng)定位的區(qū)間較大時(shí),在后續(xù)工作中將有很多候選基因需要測序驗(yàn)證,所以往往很難成功鑒定出致病基因。近年來,新一代測序技術(shù)的出現(xiàn),特別是外顯子組捕獲高通量測序技術(shù)的應(yīng)用極大的影響了基因鑒定工作的進(jìn)程。過去幾年中,外顯子組測序技術(shù)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)和分析方法在對發(fā)現(xiàn)懸而未決的單基因病致病基因方面已經(jīng)建立了豐富的框架體系。今后,該技術(shù)有可能成為鑒定單基因病的最常用的手段之一。 在本研究中,我們將采取傳統(tǒng)的全基因掃描連鎖分析法與最新的外顯子組測序技術(shù)相結(jié)合的策略,對收集到的一個(gè)DFNA家系的致病基因進(jìn)行研究。 目的鑒定一個(gè)常染色體顯性遺傳性耳聾大家系的致病基因。 方法調(diào)查了一個(gè)來自中國湖南省的五代遺傳的常染色體顯性遺傳家系。采集家系中參與者詳細(xì)的病史信息,并對其做了耳鏡檢查、體格檢查及純音測聽等。用Sanger直接測序技術(shù)排除GJB2、 GJB3、COCH、EYA4及KCNQ4幾個(gè)最常見的致病基因后,我們對家系中的24名成員進(jìn)行了全基因組掃描連鎖分析。排除了定位區(qū)間內(nèi)已知的耳聾致病基因致病可能后,選取家系中3名患者和1名正常對照成員進(jìn)行了外顯子組測序。最后使用Sanger直接測序技術(shù)驗(yàn)證家系突變與表型共分離,并進(jìn)行了家系外對照人群突變檢測。 結(jié)果該家系表現(xiàn)為非綜合征型常染色體顯性遺傳耳聾的特點(diǎn)�；颊咧g的表型特征十分相似,均表現(xiàn)為在10-20歲出現(xiàn)聽力下降,進(jìn)行性發(fā)展,到40-50歲時(shí)出現(xiàn)重度-極重度的感音神經(jīng)性耳聾,起病之初表現(xiàn)為高頻下降,最終累及全頻,大部分患者起病之初伴有高調(diào)的耳鳴。通過對GJB2、GJB3、COCH、EYA4及KCNQ4基因進(jìn)行突變篩查,未發(fā)現(xiàn)致病突變。使用MERLIN軟件對其兩點(diǎn)連鎖分析結(jié)果顯示,致病基因定位于rs887392和rs9788之間約20厘摩,在rs2041975標(biāo)記處的最大Lod值為4.448,物理圖譜上位于19：q13.31-q13.42區(qū)間內(nèi)。最后使用Sanger測序技術(shù)對外顯子組測序確定的候選致病基因進(jìn)行了驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)位于CEACAM16基因4號外顯子上的c.505GA(p.G169R)基因突變位點(diǎn),這一突變在家系中出現(xiàn)共分離且位于我們定位的區(qū)間內(nèi),在200例對照人群(400個(gè)等位基因)中未檢測到這種突變形式。 結(jié)論(1)結(jié)合基因組掃描連鎖分析的致病基因定位及外顯子組捕獲高通量測序技術(shù)鑒定了一個(gè)中國遺傳性耳聾(DFNA4)家系的致病基因CEACAM16;(2)鑒定了DFNA4基因座位上致聾基因CEACAM16有一個(gè)新的致病突變位點(diǎn)c.505GA (p.G169R),豐富了DFNA4的遺傳突變譜；(3)研究成果可為參與本研究的DFNA4家系提供相對準(zhǔn)確的遺傳咨詢,通過產(chǎn)前診斷及干預(yù)可能會(huì)有效地阻止耳聾患者的再發(fā)生。這對其它DFNA家系患者的基因檢測也具有重要的參考價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R764.43;R3411

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 馮永;王鴻涵;;非綜合征型遺傳性聾研究現(xiàn)狀及思考[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2012年03期

2 王秋菊;趙亞麗;蘭蘭;趙翠;韓明鯤;韓東一;;新生兒聾病基因篩查實(shí)施方案與策略研究[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2007年11期

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本文編號：2691005