【摘要】：目的:建立變應(yīng)性鼻炎的小鼠模型,并于其激發(fā)階段給予miRNA-375慢病毒過表達(dá)載體干預(yù),從基因和蛋白角度檢測模型小鼠鼻黏膜中胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)的差異性表達(dá),探討miR-375過表達(dá)對變應(yīng)性鼻炎中TSLP的影響及可能的調(diào)控機(jī)制。方法:采用卵清蛋白刺激小鼠來建立變應(yīng)性鼻炎的模型,并利用生理鹽水作為參照,在誘導(dǎo)小鼠變應(yīng)性鼻炎的基礎(chǔ)上構(gòu)建miR-375過表達(dá)慢病毒載體和對照載體并進(jìn)行尾靜脈注射干預(yù)。干預(yù)結(jié)束后分離出小鼠鼻腔的鼻黏膜組織,分別提取總RNA與總蛋白,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法以管家基因β-actin為內(nèi)參基因檢測各組小鼠鼻黏膜中TSLP的mRNA相對表達(dá);Western印跡法以GAPDH為內(nèi)參蛋白檢測各組小鼠鼻黏膜中TSLP的蛋白相對表達(dá)。結(jié)果:用OVA致敏的變應(yīng)性鼻炎小鼠都出現(xiàn)程度不同的打噴嚏、撓前鼻以及流清涕等癥狀,組織學(xué)病理發(fā)現(xiàn)鼻黏膜結(jié)構(gòu)破壞、炎癥細(xì)胞浸潤明顯,miR-375過表達(dá)載體慢病毒干預(yù)后前述癥狀和發(fā)現(xiàn)有所減輕。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測小鼠鼻黏膜顯示miR-375慢病毒過表達(dá)組中TSLP的mRNA相對表達(dá)水平要明顯低于變應(yīng)性鼻炎組和對照載體組(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-375慢病毒過表達(dá)組、載體對照組和變應(yīng)性鼻炎組TSLP的mRNA相對表達(dá)都要高于以生理鹽水作為對照的組(P0.05),差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western印跡法檢測顯示變應(yīng)性鼻炎組小鼠鼻黏膜中TSLP蛋白的表達(dá)明顯高于生理鹽水對照組(P0.05),miR-375慢病毒過表達(dá)載體干預(yù)后明顯降低(P0.05),但miR-375慢病毒對照載體組相對變應(yīng)性鼻炎組也出現(xiàn)了TSLP蛋白的表達(dá)下調(diào)(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:本研究探究了miRNA-375與TSLP的相關(guān)性,實(shí)驗(yàn)表明在變應(yīng)性鼻炎中,小鼠鼻腔鼻黏膜過表達(dá)的miR-375基因?qū)SLP的表達(dá)有負(fù)性調(diào)節(jié)作用,可能參與調(diào)節(jié)以Th2主導(dǎo)的免疫反應(yīng),為以TSLP為靶向的過敏性鼻炎干預(yù)方面提供證據(jù)與實(shí)驗(yàn)參考。
【圖文】：

為觀察與癥狀評分：鼻腔末次激發(fā)后 30。撓鼻 1-4 次為輕度，4 次以上為中度，，4 到 10 次為中度，10 次以上為重度過了前鼻孔是中度，涕流滿面則為重度量化的方式評判上面三個(gè)指標(biāo)，總分大本采集與處理：末次鼻腔激發(fā)后第二天醉后用眼科剪開胸暴露心臟行左心室膚皮毛，繼續(xù)沿顱骨中線分離上翻暴組織置于 RNA 保存液-20℃保存或新鮮0%EDTA 溶液脫鈣，繼續(xù)石蠟包埋，冠狀圖 1.2.1 小鼠尾靜脈注射

2 結(jié)果.1 小鼠生物學(xué)行為觀察與評分末次激發(fā)后半個(gè)小時(shí)內(nèi)觀察：變應(yīng)性鼻炎組小鼠（AR+）不間斷撓鼻，噴數(shù)較多，流涕超過前鼻孔；慢病毒載體對照組小鼠（AR+mir control）也有斷撓鼻，噴嚏次數(shù)多，但流涕多數(shù)都局限在前鼻孔；miR-375 慢病毒過表達(dá)鼠（AR+mir375）撓鼻與噴嚏次數(shù)較上述兩組明顯減少，部分小鼠有流涕，在前鼻孔；生理鹽水對照組(AR-)偶有撓鼻與噴嚏，流涕也比較少見。三個(gè)疊加量化評分結(jié)果為：生理鹽水對照組 2.10±0.47，，變應(yīng)性鼻炎組 7.86±1.04iR-375 慢病毒過表達(dá)組 4.96±0.77，慢病毒載體對照組 6.54±0..38。變應(yīng)性鼻平均得分超過 5 分，生理鹽水對照組低于 5 分，說明造模成功；慢病毒載照組評分與變應(yīng)性鼻炎組接近，但 miR-375 慢病毒過表達(dá)組較上述兩組顯降（P＜0.05）。
【學(xué)位授予單位】：海南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R765.21

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本文編號：2689932