【摘要】：目的葡萄膜炎是常見致盲眼病之一。芳香烴受體(Aryl hydrocarbon receptor,Ah R)是一種受配體激活的核受體,在人類葡萄膜炎中發(fā)揮了一定的免疫調(diào)節(jié)作用,但目前明確的機(jī)制還不清楚。本文擬用Ah R親和力最強(qiáng)的配體2,3,7,8-四氯二苯-對-二惡英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)來研究Ah R在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的作用及其機(jī)制。方法選擇C57BL/6J雌性小鼠54只,按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為三組:Na?ve組(n=18)、EAU+安慰劑組(n=18)和EAU+TCDD組(n=18)。采用視網(wǎng)膜光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白651-670(IRBP651-670)建立小鼠EAU模型。EAU+TCDD組小鼠自免疫前1天腹腔注射TCDD,EAU+安慰劑組同法給予等體積空白溶媒(橄欖油)。建模后第14天用裂隙燈觀察小鼠眼球并進(jìn)行臨床評分;眼球石蠟切片行HE染色評估小鼠視網(wǎng)膜病理改變并評分;伊文思藍(lán)染色評估血視網(wǎng)膜屏障完整性;Western blotting檢測緊密連接蛋白和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)、巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞極化標(biāo)志物和相關(guān)通路蛋白的表達(dá),TUNEL檢測視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡水平,通過免疫熒光和免疫組化檢測巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá),ELISA檢測促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果免疫后第14天,與EAU+安慰劑組相比,EAU+TCDD組小鼠臨床評分和病理評分明顯改善,血眼屏障功能明顯改善,緊密連接蛋白表達(dá)明顯升高,細(xì)胞凋亡明顯減輕,巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞活化明顯減少,M1型極化標(biāo)志物表達(dá)減少,M2型極化標(biāo)志物增加,促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表達(dá)明顯降低,NF-κB,STAT和Notch通路受到抑制。結(jié)論1、TCDD可以激活EAU小鼠視網(wǎng)膜中的Ah R,起到免疫調(diào)節(jié)作用。2、TCDD激活A(yù)h R后可以減輕EAU小鼠血眼屏障破壞,抑制視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡水平,促進(jìn)巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞從M1型向M2型極化,減少促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌。3、TCDD激活A(yù)h R后,可能通過抑制NF-κB,STAT和Notch通路來減輕EAU小鼠的炎癥反應(yīng)。
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 TCDD 改善 EAU 小鼠的臨床評分免疫后第14天，EAU+安慰劑組小鼠顯示了明顯的EAU征象，而EAU+TCDD組小鼠的眼球僅有輕微的炎癥征象（圖1a）。Naive組、EAU+安慰劑組和EAU+TCDD組小鼠的平均臨床評分分別為0，1.42±0.49和0.56±0.70（圖1b）。

圖 2 TCDD 對 EAU 病理評分的影響Figure 2 Effects of TCDD on the pathological scores of EAU(Scale bar, 20μm. n=6, **p<0.01 vs the Naive group, ##p<0.01 vs the EAU+vehicle group)2.3 TCDD 減輕 EAU 小鼠血眼屏障的破壞免疫后第 14 天，我們用對各組小鼠視網(wǎng)膜進(jìn)行伊文思藍(lán)染色和檢測緊密連接蛋白的表達(dá)來評估血眼屏障的完整性。伊文思藍(lán)染色結(jié)果顯示，Naive 組的視網(wǎng)膜血管未見滲出，而 EAU+安慰劑組的視網(wǎng)膜血管見大量滲出。在用 TCDD 治療的EAU 小鼠中，我們只觀察到輕微染料滲出（圖 3）。另外，，我們用 Western blotting 檢測各組小鼠視網(wǎng)膜中緊密連接蛋白 claudin-5、occludin 和 zo-1 的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)與 Naive 組相比，EAU+安慰劑組的緊密連接蛋白表達(dá)水平明顯降低（p<0.001）。而在 EAU+TCDD 組中，claudin-5（p<0.05）、occludin（p<0.05）和 zo-1（p<0.01）的蛋白表達(dá)水平較 EAU+安慰劑組小鼠有所
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R773.9

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本文編號：2689868