【摘要】：研究背景：真菌性角膜潰瘍?yōu)槿蜃钪饕闹旅ば匝鄄?高發(fā)于以農(nóng)業(yè)為主的發(fā)展中國家,我國是真菌性角膜潰瘍的高發(fā)地區(qū),近幾年來真菌性角膜潰瘍的報道研究越來越多,相關(guān)的臨床流行病學調(diào)查顯示其發(fā)病率已上升到感染性角膜病的首位,因此,真菌性角膜潰瘍的防治課題已成為我國致盲性眼疾的重要臨床課題。 通常情況下,真菌感染時很少侵犯正常角膜,但當角膜上皮組織被破壞,角膜基質(zhì)層直接與真菌接觸時,真菌就能通過破損處破壞角膜上皮下層以及基質(zhì)層,導致真菌性角膜潰瘍。因此,角膜上皮和基質(zhì)細胞在激活角膜的固有免疫反應(yīng)和抵抗真菌入侵中有重要作用。眾多研究已經(jīng)證明了TLR是人體固有免疫系統(tǒng)激活的關(guān)鍵因子,位于細胞膜的TLR識別來自細胞外部的病原體。但是病原微生體為了避免被識別,有其他侵入和通過上皮細胞層的方式,但是正常情況下真菌體內(nèi)的感染率并不高,這說明在避過TLR的識別后,機體一定還有其他的方式來識別入侵真菌。NOD受體蛋白家族能識別細胞內(nèi)的危險信號,啟動固有免疫系統(tǒng),它代明了細胞內(nèi)同樣有防御監(jiān)測手段。NOD受體是目前的研究熱點之一,但是關(guān)于它在角膜細胞中的表達,在抗真菌過程中的作用以及它與TLR的相互關(guān)系目前鮮有報道。 目的：研究細胞內(nèi)模式識別受體核苷酸結(jié)合的寡聚結(jié)構(gòu)域NOD受體NOD1、NOD2在角膜細胞中的表達及其激活角膜細胞固有免疫過程中的作用,并探討它與Toll樣受體TLR4在此過程中的相互關(guān)系。 方法：體外培養(yǎng)永生化人角膜上皮細胞(THCE)和永生化人角膜基質(zhì)細胞(THSF),實驗細胞分為6組,分別更換DMEM培養(yǎng)液、LPS刺激液(1μg/ml)、DAP刺激液(10μg/ml)、MDP刺激液(10μg/ml)、LPS(1μg/ml)和DAP(10μg/ml)聯(lián)合刺激液、LPS(1μg/ml)和MDP(10μg/ml)聯(lián)合刺激液,于刺激后1h,3h,6h,12h,24h分別收取細胞上清以及細胞。用ELISA法測定上清中的TNF-α和IL-6的分泌,用實時RT-PCR檢測角膜細胞中NOD1、NOD2和TLR4的mRNA表達,以及抗菌肽hBD2和LL37的mRNA的表達。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件,數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示,組內(nèi)比較采用t檢驗,各組間的比較采用方差分析,P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：在相應(yīng)配體刺激下角膜細胞中NOD1、NOD2的表達呈時間依賴性上調(diào),并能引起細胞培養(yǎng)物上清液中IL-6和TNF-α的分泌增多,以及抗菌肽LL37和hBD2的表達增加。聯(lián)合刺激組比單獨刺激組的表達量明顯增高,TLR4和NOD受體間表現(xiàn)出協(xié)同作用。 結(jié)論：這些結(jié)果提示角膜細胞中的NOD1、NOD2和TLR4這兩種胞內(nèi)外模式識別受體介導的固有免疫信號傳導通路參與了角膜上皮細胞的固有免疫反應(yīng),在角膜上皮細胞的抗真菌反應(yīng)中起到一定作用,NOD1、NOD2在角膜細胞中表達并能激活其固有免疫系統(tǒng),誘導其分泌促炎癥細胞因子。NOD2于TLR4在激活角膜細胞固有免疫系統(tǒng),誘導其分泌促炎癥細胞因子的過程中具有協(xié)同作用,為今后免疫治療提供了新的思路和靶點。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R772.21

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2667472