發(fā)布時間：2020-04-29 06:45

【摘要】：目的通過行兔眼白內障囊外摘除術建立后囊膜混濁(posterior capsular opacification,PCO)的動物模型,檢測房水中Dkk1(Dickkopf-1)及Wnt3a的含量,觀察囊外摘除術后加入Dkk1組與對照組細胞遷移及上皮間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的發(fā)生情況,研究Dkk1對于Wnt3a誘導的EMT及細胞遷移的的影響并探索可能的細胞機制。尋求新的有效抑制PCO的靶點,力求為白內障術后PCO的發(fā)生提供更好的防治方案。方法選取新西蘭大耳白兔24只,術前抽取右眼房水檢測其Wnt3a和Dkk1的濃度,右眼行白內障囊外摘除手術,術后兔子被隨機分為兩組(每組12只),即磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate buffered saline,PBS)處理組和Dkk1治療組。將大約1ml Dkk1(30ng/ml)或1ml PBS分別注射到右眼的前房中。在手術后第十四天,抽取右眼房水檢測Wnt3a和Dkk1的濃度。摘除左眼和右眼,均使用福爾馬林固定,石蠟包埋,并行酶聯(lián)免疫吸附試驗,免疫組化(immunohistochmeistry,IHC)染色,蛋白質免疫印跡(western blot,WB),免疫熒光,細胞遷移實驗等進行組織學分析。結果手術后第14天,大多數(shù)用PBS治療的右眼出現(xiàn)致密纖維化或明顯的上皮混濁,用Dkk1治療的右眼后囊顯示輕度混濁。IHC結果表明,手術后14天,用PBS處理的右眼顯示出與PCO相關的幾個特征,包括后囊中央明顯的細胞增殖和顯著的β-連環(huán)蛋白(β-catenin)核轉移。Dkk1治療組與PBS治療組相比,右眼后囊膜β-catenin核轉移較少(32.8±6.2%vs.9.2±3.1%,P0.05)。酶聯(lián)免疫吸附測定法顯示,結果顯示,加入PBS處理后,右眼前房內Wnt3a的平均濃度為173.8 pg/ml,平均Dkk1濃度為35.0 pg/ml。WB和免疫熒光染色分析,Wnt3a轉染的人晶狀體上皮細胞系(HLE-B3)細胞中誘導E-鈣粘蛋白的含量下降,纖連蛋白和α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的含量增加。然而,在Wnt3a過表達的細胞中加入Dkk1,檢測到HLE-B3細胞中E-鈣粘蛋白表達增加,纖連蛋白表達降低。此外免疫熒光還顯示:Wnt/β-catenin信號通路參與了EMT和LEC遷移,而Dkk1通過抑制β-catenin的核積累抑制了EMT和細胞遷移。傷口愈合實驗結果顯示W(wǎng)nt3a在HLE-B3細胞中引起明顯的水平和垂直遷移。而Dkk1能夠阻斷Wnt3a誘導的HLE-B3細胞遷移。Transwell遷移實驗:與對照組相比,Wnt3a過表達的HLE-B3細胞穿過聚碳酸酯膜的細胞數(shù)最多,而加入Dkk1的Wnt3a過表達的HLE-B3細胞穿過聚碳酸酯膜的細胞數(shù)減少。明膠酶譜結果顯示W(wǎng)nt3a顯著增加了應力纖維的數(shù)量,基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-1的表達以及MMP-2和MMP-9的活性。相比之下,Dkk1處理顯著減少應力纖維的量并抑制Wnt3a誘導的MMP-1表達和MMP-2和MMP-9活性的增加。結論1.Dkk1抑制兔PCO模型中的PCO形成。2.Dkk1逆轉了Wnt3a過表達的HLE-B3細胞中EMT相關蛋白的表達。3.Dkk1抑制Wnt3a過表達的HLE-B3細胞的遷移。4.Dkk1抑制HLE-B3細胞中Wnt3a誘導的β-catenin核轉移。5.Dkk1抑制Wnt3a過表達的HLE-B3細胞中細胞骨架合成、MMP1的表達、MMP-2和MMP-9的活性。
【圖文】：

圖 1 Dkk1 抑制家兔 PCO 模型中的 PCO 形成。術后 14 天，PBS 治療的右眼明顯的后囊膜混濁，Dkk1 治療的右眼后顯示輕度混濁。圖 2 術后 14 天，，用 PBS 或 Dkk1 的處理，發(fā)生細胞沿右眼后囊遷移，α-SMA 表達增強，具

12內蒙古醫(yī)科大學碩士研究生學位論文（2018）Wnt/β-catenin 通路干擾的結果。圖 1 Dkk1 抑制家兔 PCO 模型中的 PCO 形成。術后 14 天，PBS 治療的右眼明顯的后囊膜混濁，Dkk1 治療的右眼后顯示輕度混濁。
【學位授予單位】：內蒙古醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R779.6

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 馬楠;嚴宏;馬吉獻;;晚期糖基化終末產(chǎn)物受體在年齡相關性白內障及透明晶狀體上皮細胞的表達[J];眼科新進展;2011年06期

2 洪偉;;糖尿病性白內障晶狀體上皮細胞的電鏡觀察[J];解剖學研究;2011年01期

3 鄒俊;盧奕;褚仁遠;;風疹病毒感染人胚晶狀體上皮細胞對熱休克蛋白及其轉錄因子表達的影響[J];復旦學報(醫(yī)學版);2010年01期

4 趙婷婷;張璐;王文飛;王琳;劉平;;高糖對人晶狀體上皮細胞凋亡相關基因表達的影響[J];眼科新進展;2010年04期

5 白晶;張勁松;郭蓮英;;骨連蛋白對人晶狀體上皮細胞在人工晶狀體上黏附的影響[J];眼科新進展;2008年05期

6 杜倩;周健;惠延年;張自峰;張樂;關小榮;;高濃度葡萄糖體外對人晶狀體上皮細胞整合素連接激酶表達的影響[J];國際眼科雜志;2008年04期

7 劉玉福;劉宏偉;;人晶狀體上皮細胞成纖維細胞生長因子受體蛋白的檢測(英文)[J];國際眼科雜志;2008年08期

8 劉玉福;劉宏偉;;堿性成纖維細胞生長因子基因在人晶狀體上皮細胞內的表達[J];國際眼科雜志;2008年07期

9 鄒俊;盧奕;褚仁遠;;體外培養(yǎng)人胚晶狀體上皮細胞生長特性的研究[J];山東大學耳鼻喉眼學報;2008年05期

10 王靜波;惠延年;;整合素在晶狀體上皮細胞中的表達及其作用研究進展[J];眼視光學雜志;2007年04期

相關會議論文 前10條

1 任美俠;周健;張妍春;;高濃度葡萄糖對人晶狀體上皮細胞遷移的影響[A];第十四屆西北五省眼科學術大會論文集[C];2013年

2 李宏武;姚克;孫麗霞;;人晶狀體上皮細胞經(jīng)手機頻段微波輻射后的2-D圖譜及差異分析[A];2005年浙江省眼科學術會議論文集[C];2005年

3 李宏武;姚克;金紅穎;孫麗霞;;人晶狀體上皮細胞蛋白質組的雙向電泳和質譜鑒定[A];2006年浙江省眼科學術會議論文集[C];2006年

4 李宏武;姚克;金紅穎;孫麗霞;;人晶狀體上皮細胞蛋白質組的雙向電泳和質譜鑒定[A];2006年浙江省眼科學術會議論文集[C];2006年

5 付榮嶸;張勁松;;纖維連接蛋白對人晶狀體上皮細胞系的增殖、粘附和移行的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

6 俞一波;姚克;吳煒;;急性手機微波輻射對人眼晶狀體上皮細胞熱休克蛋白表達的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

7 安小玲;張勁松;;肝細胞生長因子對晶狀體上皮細胞抗凋亡作用信號通路的研究[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

8 呂志剛;黃文麗;蔣永祥;劉天津;;端粒酶活性在兔后囊膜混濁晶狀體上皮細胞中的表達及意義[A];2008年浙江省眼科學術會議論文集[C];2008年

9 金紅穎;姚克;馬進;楊春虎;李宏武;湯霞靖;;過氧化氫對小窩蛋白在人類晶狀體上皮細胞中分布與表達的影響[A];2005年浙江省眼科學術會議論文集[C];2005年

10 李娥;蔡小軍;;硫酸鋅抑制過氧化氫誘導大鼠晶狀體上皮細胞[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

相關重要報紙文章 前3條

1 王振嶺;消化分離法培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞[N];中國醫(yī)藥報;2002年

2 張中橋;白內障與晶狀體上皮細胞減少有關[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

3 張中橋;白內障與晶狀體上皮細胞改變有關[N];中國醫(yī)藥報;2002年

相關博士學位論文 前10條

1 杜蓓;BMPs對應激狀態(tài)下晶狀體上皮細胞的作用和機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2018年

2 張璐;miR-30a在糖尿病性白內障晶狀體上皮細胞中的表達及功能研究[D];山東大學;2018年

3 馬成霞;EphA2在地塞米松作用的人晶狀體上皮細胞中的表達變化及其意義[D];鄭州大學;2018年

4 陸博;氧化應激調控晶狀體上皮細胞凋亡機制的研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

5 張一棟;1.8GHz微波輻射對人晶狀體上皮細胞蛋白質表達影響的研究[D];浙江大學;2012年

6 王凱軍;低強度微波輻射對晶狀體上皮細胞和晶狀體的損傷及對相關調控基因表達的影響[D];浙江大學;2004年

7 饒惠英;鈍挫性眼外傷動物模型中晶狀體上皮細胞熱休克蛋白的表達及其調節(jié)[D];浙江大學;2005年

8 吳志鴻;紫外線誘導的人LEC DNA損傷修復機制及抗氧化劑的拮抗作用的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2005年

9 尹連榮;靶向毒素DT_（389）-hbFGF的克隆表達及對人晶狀體上皮細胞毒性研究[D];天津醫(yī)科大學;2005年

10 孫麗霞;急性手機微波輻射對人晶狀體上皮細胞DNA的損傷作用及細胞抗損傷反應的實驗研究[D];浙江大學;2006年

相關碩士學位論文 前10條

1 劉婷婷;Dickkopf-1抑制人晶狀體上皮細胞中Wnt3a誘導的細胞遷移和EMT[D];內蒙古醫(yī)科大學;2018年

2 李娟;黑豆提取物花青素對大鼠晶狀體上皮細胞抑制作用的實驗研究[D];延邊大學;2018年

3 韓九利;晶狀體上皮細胞中Hsf4b/S299磷酸化修飾的信號通路研究[D];河南大學;2018年

4 程榮;自噬可減輕高糖條件下晶狀體上皮細胞中的氧化損傷[D];青島大學;2018年

5 賀亞亞;Sep15基因沉默對高糖誘導的人晶狀體上皮細胞中整合素表達的影響[D];華中科技大學;2016年

6 武莉莉;年齡相關性白內障晶狀體上皮細胞端粒酶活性表達及超微結構研究[D];福建醫(yī)科大學;2004年

7 姚剛;體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞整合素的表達及維拉帕米對其表達的抑制作用[D];廣西醫(yī)科大學;2007年

8 范可順;維生素E琥珀酸酯對人晶狀體上皮細胞生長影響的研究[D];華中科技大學;2007年

9 王濤;羥基喜樹堿對培養(yǎng)兔晶狀體上皮細胞的影響[D];青島大學;2002年

10 于同利;高糖對大鼠晶狀體上皮細胞的影響及茶多酚干預作用的實驗研究[D];山東中醫(yī)藥大學;2008年

本文編號：2644326