發(fā)布時(shí)間：2020-04-25 23:00

【摘要】：目的感音神經(jīng)性耳聾是導(dǎo)致言語交流障礙的常見致殘性疾病,是全球面臨的重大公共衛(wèi)生問題。耳聾具有高度的遺傳異質(zhì)性,相關(guān)基因眾多。解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心課題組在一個(gè)中國顯性遺傳性耳聾大家系中檢測到了IFNLR1基因雜合錯(cuò)義突變c.296GA(p.Arg99His),在國際上首次報(bào)道了該基因突變可以導(dǎo)致耳聾。本研究為了明確IFNLR1基因與聽覺功能的關(guān)系并進(jìn)一步研究該基因的功能,從動(dòng)物模型入手進(jìn)行了相關(guān)探索。方法(1)利用蛋白免疫印跡法及免疫熒光染色技術(shù)明確小鼠內(nèi)耳中Ifnlr1的表達(dá)情況并進(jìn)行定位;(2)利用嗎啉代寡核苷酸技術(shù)構(gòu)建ifnlr1基因敲低斑馬魚模型,結(jié)合轉(zhuǎn)基因斑馬魚及特殊染料,觀察ifnlr1功能缺失后斑馬魚在不同發(fā)育時(shí)段的一般狀態(tài)、側(cè)線系統(tǒng)發(fā)育情況以及凋亡和巨噬細(xì)胞遷移情況;(3)利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)在斑馬魚m RNA水平對ifnlr1進(jìn)行功能分析。結(jié)果(1)Ifnlr1基因在小鼠耳蝸廣泛表達(dá),尤其在Corti’s器的毛細(xì)胞、支持細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)都有表達(dá);(2)ifnlr1基因敲低斑馬魚在發(fā)育后期一般表型出現(xiàn)異常,側(cè)線神經(jīng)丘數(shù)量及丘內(nèi)的毛細(xì)胞、支持細(xì)胞數(shù)量減少,凋亡和巨噬細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)無特異表現(xiàn);(3)轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)眾多差異表達(dá)基因,針對這些基因的GO功能分析及KEGG富集通路功能分析具體見文中數(shù)據(jù)。結(jié)論IFNLR1作為耳聾新基因,已明確其在小鼠的耳蝸內(nèi)有表達(dá),在與感音神經(jīng)性耳聾相關(guān)的內(nèi)毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)都有明確表達(dá)。ifnlr1基因敲低斑馬魚模型中側(cè)線神經(jīng)丘及丘內(nèi)的毛細(xì)胞、支持細(xì)胞受累,導(dǎo)致受累的原因可能與凋亡和炎癥反應(yīng)無關(guān),相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
【圖文】：

圖 1-1 Ifnlr1 在小鼠耳蝸的蛋白電泳圖：Ifnlr1 分子量為 55kDa。）Ifnlr1 在小鼠內(nèi)耳的表達(dá)定位采用免疫熒光法檢測了 Ifnlr1 蛋白在小鼠內(nèi)耳中的分布及表達(dá)情況

圖 1-2 Ifnlr1 在小鼠內(nèi)耳免疫熒光定位圖（1）注：圖 A 為 10 倍鏡下耳蝸免疫熒光圖，白色“ ”指示 Corti’s 器，黃色“ ”指示螺旋神經(jīng)節(jié)，藍(lán)色“ ”指示前庭膜。圖 B 為 40 倍鏡下螺旋神經(jīng)節(jié)免疫熒光圖。圖 C 為 100 倍油鏡下 Corti’s器免疫熒光圖，白色“ ”指示內(nèi)毛細(xì)胞，黃色“ ”指示外毛細(xì)胞，白色“ ”指示內(nèi)柱細(xì)胞，黃色“ ”
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R764.43

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本文編號：2640788