發(fā)布時間：2020-04-18 22:37

【摘要】：研究目的晚期下咽癌患者治療后死亡原因可歸結(jié)為以下幾種:1.局部復發(fā);2.遠處轉(zhuǎn)移;3.放化療抵抗。就化療而言,目前臨床上頭頸鱗癌經(jīng)典的化療方案是TPF方案,包括Taxol,DDP,5-FU等。本課題主要是關(guān)于下咽癌化療耐藥機制的研究,其目的主要是:對比檢測FaDu、FaDu/T細胞的惡性生物學特性的不同;檢測化療抵抗及抗凋亡相關(guān)蛋白在FaDu和FaDu/T細胞系中不同的表達狀態(tài);蛋白酶體抑制劑MG-132對下咽癌耐藥及抗凋亡等惡性生物學行為的逆轉(zhuǎn)作用;探討JNK信號轉(zhuǎn)導通路及核轉(zhuǎn)錄蛋白NF-κB在MG-132逆轉(zhuǎn)下咽癌FaDu/T細胞多藥耐藥過程中P-gp表達變化中的作用,進一步揭示下咽癌細胞的化療抵抗性及其它惡性生物學特性的深層次原因。材料與方法前期工作中我們采用紫杉醇濃度梯度遞增法成功建立了 FaDu細胞的耐紫杉醇單克隆細胞系,簡稱FaDu/T,在此基礎(chǔ)上,檢測化療耐藥蛋白P-gp及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2,Bax及caspase-3不同的表達,通過MTT對比檢測兩種細胞系半數(shù)抑制濃度即IC50,結(jié)果發(fā)現(xiàn)FaDu/T細胞具有比FaDu細胞更強的多藥耐藥性;而多藥耐藥基因ABCB1及相應(yīng)蛋白P-gp,凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2,Bax及caspase-3在兩個細胞系中表達變化情況分別通過RT-PCR或者Western blotting檢測;蛋白酶體抑制劑MG-132對下咽癌FaDu/T的多藥耐藥性及抗凋亡特性的抑制、不同時間點JNK信號轉(zhuǎn)導通路相關(guān)蛋白的表達變化及NF-κB核轉(zhuǎn)錄蛋白活性主要通過MTT、流式細胞術(shù)及Western blotting檢測手段進行檢測。結(jié)果1.FaDu/T細胞系成功建立。通過檢測發(fā)現(xiàn)FaDu/T比FaDu細胞具有更強的惡性生物學特性。2.FaDu/T細胞系中多藥耐藥相關(guān)蛋白P-gp及抗凋亡蛋白Bcl-2與FaDu細胞相比表達明顯增加,但Bax及caspase-3等凋亡相關(guān)蛋白表達量明顯下降。3.蛋白酶體抑制劑MG-132可以明顯逆轉(zhuǎn)FaDu/T的多藥耐藥及抗凋亡等惡性生物學行為。4.FaDu細胞初始加入紫杉醇后我們檢測到JNK信號轉(zhuǎn)導通路隨時間被逐漸激活,但是在穩(wěn)定的FaDu/T細胞中JNK信號轉(zhuǎn)導通路呈現(xiàn)部分失活狀態(tài),但是和FaDu/T細胞建立過程中核轉(zhuǎn)錄蛋白NF-κB核轉(zhuǎn)錄活性不斷增強。低劑量的蛋白酶體抑制劑MG-132即可使FaDu/T細胞中呈現(xiàn)失活狀態(tài)的JNK信號通路重新激活,FaDu/T細胞中NF-κB核轉(zhuǎn)錄活性則被MG-132明顯抑制。5.預先在FaDu/T細胞加入JNK特異性抑制劑SP600125后重新加入MG-132,P-gp的表達未見明顯的時間依賴性變化,JNK信號轉(zhuǎn)導通路及核轉(zhuǎn)錄蛋白NF-κB共同參與了下咽癌的化療耐藥過程,但對轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用相反。結(jié)論1.與FaDu細胞系相比,其耐紫杉醇細胞系FaDu/T細胞具有更強的惡性生物學特性。2.蛋白酶體抑制劑MG-132可以有效的逆轉(zhuǎn)其惡性生物學行為。3.JNK信號轉(zhuǎn)導通路及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB共同參與了 MG-132對下咽癌惡性生物學行為的逆轉(zhuǎn)過程。
【圖文】：

圖１．表示ＦａＤｕ／Ｔ細胞中多藥耐藥基因ＡＢＣＢ１及其對應(yīng)的蛋白Ｐ－ｇｐ表達水逡逑平明顯高于ＦａＤｕ細胞

圖２．與ＦａＤｕ細胞相比ＦａＤｕ／Ｔ細胞系中Ｂｃｌ－２／邋Ｂａｘ的蛋白表Ｃａｓｐａｓｅ－３表達水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（＊邋ｐ邋＜邋０．０５）逡逑Ａ邐．．，；，，：；，．邐．逡逑ｐ－ｇｐ邐“ 擺．．逡逑Ｂｃｉ－２逡逑Ｃａｐａｓｅ－３邋’＇邐”逡逑Ａｃ邋ｔｉｎ逡逑ＦａＯｕ／Ｘ邋ＦａＤｕｒｒ邋＾邋ＭＯ邋Ｉ邋３２逡逑Ｂｉ＾邐了ｓ￣］邐ｎ逡逑，Ｓ邋６０Ｃｈ邐０邋ｃ？ｒｔｆＭｒｔｅ－ｓ邋１逡逑爸５0４邐Ｉ邋Ｑ邋Ｂａｘ邋ｊ邐」…逡逑ｆｅ－邋４０＜ｉ逡逑Ｍ邋３００－逡逑－ｇ邋２0ｑ－邐義：逡逑＾邐…．．逡逑
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.63

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 曹軼P;周梁;吳海濤;李筱明;黃維庭;陳小玲;李采;陶磊;;下咽癌386例臨床特征及療效分析[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2016年06期

本文編號：2632614