發(fā)布時(shí)間：2020-04-05 14:34

【摘要】：目的:研究micro RNA142(miR-142)在體外細(xì)胞中如何影響其表達(dá),分析驗(yàn)證AKT2與miR-142之間的關(guān)系,實(shí)驗(yàn)研究其與角膜血管新生的關(guān)系,初步找到相關(guān)基礎(chǔ)機(jī)制。方法:本研究設(shè)置空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、過(guò)表達(dá)miR-142組以及干擾miR-142組。分別利用miR-142模擬物(mimic)和抑制物(inhibitor)過(guò)表達(dá)和干擾miR-142;CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-142對(duì)HUVECs增殖能力的影響;雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證AKT2是否為miR-142的直接靶基因;qPCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-142對(duì)AKT2表達(dá)水平的影響。結(jié)果:CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和過(guò)表達(dá)miR-142組在96h的吸光度均值分別為872.21±44.20、842.16±49.54和1407.91±16.58,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=102.8,P=0.000);干擾miR-142后HUVECs增殖能力明顯減弱(空白對(duì)照組=919.69±25.46,陰性對(duì)照組=856.76±36.22,干擾miR-142組=602.77±25.62;F=72.8,P=0.000);雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-142后AKT2表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化(對(duì)照組=0.36,過(guò)表達(dá)miR-142組=0.46,P=0.147);qPCR結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)miR-142(0.408±0.046)后AKT2表達(dá)水平較陰性對(duì)照組(0.173±0.022)升高(P=0.018),干擾miR-142組(0.16±0.02)較陰性對(duì)照組(0.362±0.068)明顯降低(P=0.037),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了miR-142對(duì)AKT2基因的調(diào)控作用;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),shRNA干擾AKT2后miR-142促進(jìn)HUVECs增殖的作用消失,對(duì)照組、過(guò)表達(dá)miR-142組、過(guò)表達(dá)miR-142+sh RNA-AKT2組和shRNA-AKT2組的96 h吸光度值分別為981.80±75.40、1357.81±47.56、806.39±49.70和921.59±40.38,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=40.97,P=0.000)。結(jié)論:miR-142通過(guò)上調(diào)AKT2的表達(dá)促進(jìn)HUVECs增殖,從而促進(jìn)角膜血管新生。
【圖文】：

miR-142促進(jìn)HUVECs增殖
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R772.2

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本文編號(hào)：2615139