【摘要】：摘要目的研究低能量激光療法(Low-level laser therapy,LLLT)對人Tenon囊成纖維細(xì)胞(human Tenon’s capsule fibroblasts,HTFs)增殖遷移的影響;確定LLLT影響HTFs細(xì)胞增殖遷移的最適激光輻照參數(shù);探討低能量激光療法調(diào)控人Tenon囊成纖維細(xì)胞中胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)的表達(dá)并影響成纖維細(xì)胞增殖遷移的機制。方法1.建立LLLT誘導(dǎo)的HTFs細(xì)胞株模型于白內(nèi)障超聲乳化手術(shù)中取人Tenon囊組織塊培育成纖維細(xì)胞,體外培養(yǎng)原代HTFs細(xì)胞,傳代后擇取生長良好的對數(shù)生長期HTFs細(xì)胞試驗。設(shè)置不同激光劑量組(0,0.5,1.0,2.0,5.0J/cm~2),未照射組作為對照組,采用CCK8法初步選出LLLT促進(jìn)HTFs細(xì)胞生長活力的最適輻照劑量;設(shè)定相同激光劑量組,選用直徑分別為10mm和35mm的圓形均質(zhì)光斑進(jìn)行激光照射,選出LLLT對HTFs細(xì)胞的最適輻照參數(shù)。2.檢測LLLT對HTFs細(xì)胞增殖、遷移作用的影響用不同劑量半導(dǎo)體激光分組照射成纖維細(xì)胞后,采用CCK-8法檢測LLLT對成纖維細(xì)胞增殖的影響;采取Transwell法、劃痕試驗檢測LLLT對人Tenon囊成纖維細(xì)胞遷移的影響;確定低能量半導(dǎo)體激光影響HTFs細(xì)胞增殖、遷移作用的最佳輻照度。3.檢測Tβ_4在LLLT誘導(dǎo)的HTFs細(xì)胞中的表達(dá)水平采用Western Blot和免疫熒光法來檢測Tβ4蛋白表達(dá)情況,以實時定量PCR檢測Tβ4mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果1.成功培育HTFs細(xì)胞,細(xì)胞呈梭形,漩渦狀排列,與HTFs細(xì)胞形態(tài)相符。2.不同劑量的LLLT對HTFs細(xì)胞生長存在劑量依賴性,即在一定的激光輻照劑量范圍內(nèi)HTFs生長加速,且在2.0J/cm~2的LLLT輻照下HTFs細(xì)胞生長最快,與對照組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);3.相同劑量的LLLT刺激下,不同光斑的大小對HTFs細(xì)胞生長活力有所不同;直徑為10mm圓形勻致光斑比35mm光斑輻照效果更佳。4.成功建立LLLT誘導(dǎo)的HTFs細(xì)胞株模型:低能量半導(dǎo)體激光照射系統(tǒng)功率密度設(shè)定為20mw/cm~2,光斑直徑為10mm,圓形勻致光斑。采用脈沖波照射模式,設(shè)定不同激光劑量分組:0J/cm~2(對照組);實驗組0.5J/cm~2(20mw/cm~2 25s);1.0J/cm2(20mw/cm~2 50s);2.0J/cm~2(20mw/cm~2 100s);5.0J/cm~2(20mw/cm~2 250s)。5.在CCK-8法和Transwell法、劃痕實驗中,表明用低強度半導(dǎo)體激光治療能促進(jìn)HTFs的增殖和遷移;且LLLT促進(jìn)HTFs的增殖和遷移的最適照射劑量為2.0J/cm~2,相比于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。6.Western Blot和免疫熒光實驗證實了LLLT對于Tβ4的表達(dá)具有調(diào)控作用,且該作用在照射劑量和時間上存在雙向依賴性,促進(jìn)其活性的最佳照射劑量為2.0J/cm~2,相比于對照組(0J/cm~2)差異有顯著意義(P0.05)。此外實時定量PCR擴增得到單一產(chǎn)物,并且在2.0J/cm~2低能量半導(dǎo)體激光照射劑量下,Tβ4在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)量明顯增強,差異有顯著意義(P0.05)。結(jié)論1.低能量半導(dǎo)體激光可促進(jìn)人Tenon囊成纖維細(xì)胞增殖和遷移作用;2.胸腺素β4的激活可能與低能量半導(dǎo)體激光誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖和遷移作用存在一定的相關(guān)性;3.低能量半導(dǎo)體激光可能調(diào)控胸腺素β4參與人Tenon囊成纖維細(xì)胞的增殖與遷移。
【圖文】：

12A B圖 1-1A 正常對照組 HTFs 細(xì)胞，呈典型的梭形，胞體狹長, 較 LLLT 輻照組，，細(xì)胞為緩慢，3 天內(nèi)未能融合。圖 1-1B LLLT 輻照后 HTFs 細(xì)胞，細(xì)胞活性增強，生長致密，融合時細(xì)胞呈放射狀狀走行，單層生長，較對照組，細(xì)胞生長迅速，3 天后細(xì)胞生長致密達(dá) 80%以上融合

12A B圖 1-1A 正常對照組 HTFs 細(xì)胞，呈典型的梭形，胞體狹長, 較 LLLT 輻照組，細(xì)胞為緩慢，3 天內(nèi)未能融合。圖 1-1B LLLT 輻照后 HTFs 細(xì)胞，細(xì)胞活性增強，生長致密，融合時細(xì)胞呈放射狀狀走行，單層生長，較對照組，細(xì)胞生長迅速，3 天后細(xì)胞生長致密達(dá) 80%以上融合
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R779.6

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本文編號：2606496