本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用細(xì)菌纖維素膜構(gòu)建組織工程角膜基質(zhì)的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的角膜病是主要的致盲眼病之一,進(jìn)行角膜移植術(shù)是最有效的治療途徑,但存在著植片供體不足,移植排斥等問題。組織工程角膜的相關(guān)研究為解決角膜移植關(guān)于植片供體不足的問題提供了新的途徑。本文的研究目的是體外構(gòu)建組織工程角膜基質(zhì),觀察角膜上皮細(xì)胞和角膜基質(zhì)細(xì)胞在細(xì)菌纖維素膜上的生長情況,觀察細(xì)菌纖維素膜的生物相容性；并通過體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)菌纖維素膜的透明性及生物相容性,為組織工程角膜基質(zhì)支架材料的選擇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1、分離兔角膜上皮細(xì)胞和兔角膜基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),應(yīng)用CK-3和Vimentin試劑盒進(jìn)行細(xì)胞鑒定并在顯微鏡下觀察其生長情況。2、分別將兔角膜上皮細(xì)胞和兔角膜基質(zhì)細(xì)胞接種到細(xì)菌纖維素膜(BC)上,構(gòu)建組織工程角膜上皮和組織工程角膜基質(zhì),并利用LIVE—DEAD田胞活性毒性檢測試劑盒檢測細(xì)胞活性。3、應(yīng)用掃描電鏡和透射電鏡觀察兔角膜基質(zhì)細(xì)胞在BC膜上的生長情況,應(yīng)用掃描電鏡觀察兔角膜上皮細(xì)胞在BC膜上的生長情況,觀察BC膜的生物相容性。4、構(gòu)建兔角膜基質(zhì)囊袋模型,將BC膜植入囊袋內(nèi),對(duì)照組僅構(gòu)建角膜基質(zhì)囊袋模型。術(shù)后1天、1周、1個(gè)月、3個(gè)月用裂隙燈觀察移植情況并拍照。5、術(shù)后1周、1個(gè)月、3個(gè)月取兔角膜,進(jìn)行病理切片檢查,HE染色,檢測移植后炎癥反應(yīng)情況。結(jié)果1、成功分離培養(yǎng)兔角膜上皮細(xì)胞和兔角膜基質(zhì)細(xì)胞,細(xì)胞鑒定結(jié)果為陽性,表明該細(xì)胞為角膜上皮細(xì)胞和角膜基質(zhì)細(xì)胞。2、細(xì)胞活性毒性檢測結(jié)果顯示兔角膜上皮細(xì)胞和兔角膜基質(zhì)細(xì)胞在BC膜上能夠存活,且存活率基本達(dá)100%,BC膜無細(xì)胞毒性。3、掃描電鏡和透射電鏡檢查的結(jié)果表明兔角膜基質(zhì)細(xì)胞在BC膜上生長狀態(tài)良好,細(xì)胞活躍,細(xì)胞與BC膜連接緊密,BC膜生物相容性良好,應(yīng)用掃描電鏡檢查的結(jié)果顯示兔角膜上皮細(xì)胞在BC膜上生長狀態(tài)良好。4、成功構(gòu)建兔角膜基質(zhì)囊袋模型,裂隙燈觀察顯示植片透明,無明顯炎癥反應(yīng)。5、HE染色結(jié)果顯示BC膜與周圍組織無明顯間隔,與周圍組織相互融合,無明顯炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)論體外實(shí)驗(yàn)證明兔角膜上皮細(xì)胞和兔角膜基質(zhì)細(xì)胞在BC膜上生長狀態(tài)良好,BC膜無明顯細(xì)胞毒性,生物相容性良好,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證明BC膜的生物相容性好,可作為構(gòu)建組織工程角膜基質(zhì)的新型生物學(xué)材料。
【關(guān)鍵詞】：角膜上皮細(xì)胞 角膜基質(zhì)細(xì)胞 生物相容性 細(xì)菌纖維素膜 組織工程角膜基質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R779.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-11
• 前言11-15
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料15-18
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)菌纖維素膜15-16
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)所用的主要儀器和設(shè)備16-17
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑及溶液配制17-18
• 1.2 方法18-23
• 1.2.1 兔角膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞分離和原代培養(yǎng)18
• 1.2.2 角膜上皮細(xì)胞的鑒定18-19
• 1.2.3 角膜基質(zhì)細(xì)胞的鑒定19-20
• 1.2.4 構(gòu)建組織工程角膜上皮和組織工程角膜基質(zhì)基質(zhì)20
• 1.2.5 細(xì)胞活性毒性檢測20
• 1.2.6 掃描電鏡檢測角膜上皮和基質(zhì)細(xì)胞生長情況20-21
• 1.2.7 透射電鏡檢測21
• 1.2.8 構(gòu)建兔角膜基質(zhì)囊袋模型21
• 1.2.9 樣本收集及組織病理染色21-23
• 1.3 結(jié)果23-30
• 1.3.1 兔角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定23
• 1.3.2 兔角膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定23-24
• 1.3.3 細(xì)胞在BC膜上活性毒性檢測結(jié)果24-26
• 1.3.4 掃描電鏡觀察上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞檢測結(jié)果26-27
• 1.3.5 透射電鏡檢測結(jié)果27-28
• 1.3.6 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)裂隙燈觀察結(jié)果28
• 1.3.7 組織病理染色結(jié)果28-30
• 1.4 討論30-37
• 1.4.1 角膜盲的現(xiàn)狀以及支架材料研究的現(xiàn)狀30-32
• 1.4.2 細(xì)菌纖維素膜(BC)的優(yōu)勢32-35
• 1.4.3 不足之處35-37
• 1.5 小結(jié)37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述 組織工程角膜上皮種子細(xì)胞研究新進(jìn)展47-57
• 綜述參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57

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本文編號(hào)：259308