本文關(guān)鍵詞：Rapamycin通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑保護光損傷中視網(wǎng)膜感光細胞，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究mTOR抑制劑Rapamycin保護光損傷中視網(wǎng)膜感光細胞（661w）的分子機制和信號途徑。 方法：將661w細胞暴露于2600Lux可見光，用MTT及碘化丙啶（PI）染色法檢測細胞活性及細胞死亡率；用DCFH-DA方法檢測細胞內(nèi)活性氧簇(ROS)的變化；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形態(tài)變化；通過Western Blot和定量RT-PCR分別在蛋白和mRNA水平檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物的變化。經(jīng)過Rapamycin預(yù)處理后，利用Western Blot和定量RT-PCR分別從蛋白表達和mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測mTOR途徑下游因子及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的三條主要信號途徑，包括: PERK、IRE1及ATF6通路的變化。此外，還應(yīng)用經(jīng)典內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷細胞模型（DTT誘導(dǎo)）進一步驗證Rapamycin是通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑發(fā)揮神經(jīng)保護作用。 結(jié)果：在661w細胞光損傷模型中，光照導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的三條下游信號通路激活，EIF2a、ATF4、CHOP、IRE1、BIP和ATF6在蛋白質(zhì)表達和mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯升高。Rapamycin能明顯抑制mTOR的活化及其下游翻譯起始因子4EBP1，p-4EBP1，P70，p-P70和磷酸化核糖體蛋白S6激酶（P-S6K）的表達。Rapamycin顯著降低光損傷所誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白表達與mRNA轉(zhuǎn)錄的上調(diào)。此外，，在經(jīng)典內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷細胞模型中，Rapamycin分別在蛋白質(zhì)和mRNA水平上同樣表現(xiàn)出對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白表達與轉(zhuǎn)錄上調(diào)的抑制作用。 結(jié)論：在光損傷細胞模型中，可見光照射造成661w細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；mTOR抑制劑Rapamycin通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑發(fā)揮保護作用；同時在經(jīng)典內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷細胞模型中也證實Rapamycin是通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑對661w細胞發(fā)揮保護作用；Rapamycin可能成為治療視網(wǎng)膜光損傷一種潛在的神經(jīng)性保護藥。
【關(guān)鍵詞】：視網(wǎng)膜光損傷 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 神經(jīng)保護 哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 雷帕霉素(Rapamycin) 感光細胞(661w細胞)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-6
• 英文縮略詞6-8
• 目錄8-10
• 第1章 綜述10-17
• 1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑10-12
• 2 mTOR 信號通路12-13
• 3 mTOR 抑制劑與 ER stress 的關(guān)系13
• 4 展望13-14
• 參考文獻14-17
• 第2章 引言17-19
• 第3章 材料和方法19-24
• 3.1 實驗材料19-20
• ⑴ 試劑19
• ⑵ 主要儀器和設(shè)備19-20
• 3.2 實驗方法20-23
• ⑴ 661w 細胞培養(yǎng)20
• ⑵ 光照組及對照組細胞處理方法20
• ⑶ PI 染色20
• ⑷ 活性氧測定20-21
• ⑸ 細胞活性 MTT 實驗21
• ⑹ 透射電子顯微鏡21-22
• ⑺ Western Blot實驗22
• ⑻ 實時定量 PCR（Real-time quantitative PCR)22-23
• 3.3 統(tǒng)計學(xué)方法23-24
• 第4章 實驗結(jié)果24-41
• 4.1 Rapamycin 對 mTOR 信號通路的抑制作用24-25
• 4.2 Rapamycin 在 661w 細胞光損傷中的保護作用25-26
• 4.3 光照誘導(dǎo) 661w 細胞產(chǎn)生活性氧26-27
• 4.4 光照誘導(dǎo) 661w 細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)27-30
• 4.5 Rapamycin 在光照誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中具有保護作用30-34
• 4.6 Rapamycin 在 DTT 誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷中的保護作用34
• 4.7 DTT 誘導(dǎo)細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)34-38
• 4.8 Rapamycin 抑制 DTT 誘導(dǎo)的細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)38-41
• 第5章 討論41-43
• 第6章 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-47
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果47-48
• 致謝48

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柯丹霞;印遇龍;;小G蛋白對mTOR信號通路的調(diào)控[J];動物營養(yǎng)學(xué)報;2013年08期

2 程玉;李春輝;;胃癌中Cx43與PI3K/Akt/mTOR信號通路相關(guān)性的研究進展[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年05期

3 陳松峰;邵增務(wù);;自噬相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進展[J];國際骨科學(xué)雜志;2013年04期

4 徐磊;張雙;胡厚祥;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與心血管疾病[J];國際心血管病雜志;2013年05期

5 鄭溜豐;彭健;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)整合外周信號調(diào)節(jié)采食量的分子機制[J];動物營養(yǎng)學(xué)報;2013年10期

6 周亮;張喜鳳;周娜汝;吳蓉花;李運生;張宇;張運海;;雷帕霉素對小鼠體外受精胚胎早期發(fā)育的影響[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2013年12期

7 Yun-Yun Zhou;Chang-Zheng Chen;Yu Su;Lu Li;Zuo-Hui-Zi Yi;Hang Qi;Ming Weng;Yi-Qiao Xing;;Effect of EGb761 on light-damaged retinal pigment epithelial cells[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2014年01期

8 Liang Chen;Xiao-Wei Zhang;;Which lamp will be optimum to eye? Incandescent,fluorescent or LED etc[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2014年01期

9 原銘貞;高廣媛;李波;董春玲;王司儀;梁豪君;劉相良;劉笑玎;;過氧化物酶6與肺部炎癥性疾病關(guān)系的研究進展[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

10 張標(biāo);朱小年;馬璐;陳雯;陳麗萍;;α4在化學(xué)致癌物誘導(dǎo)細胞轉(zhuǎn)化中的作用[J];癌變.畸變.突變;2014年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Jianbin Zhang;Rui Cao;Tongjian Cai;Michael Aschner;Fang Zhao;Ting Yao;Yaoming Chen;Zipeng Cao;Wenjing Luo;Jingyuan Chen;;The role of autophagy dysregulation in manganese-induced dopaminergic neurodegeneration[A];第十一屆全國博士生學(xué)術(shù)年會（生物醫(yī)藥專題）論文集（中冊，墻報P1-P24）[C];2013年

2 孟韜;馬蘭萍;于霆;王昕;余科;沈競康;;mTOR激酶抑制劑SCC-31的臨床前研究[A];第十二屆全國青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會論文集[C];2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 葉俊麗;HSP70介導(dǎo)細胞氧化應(yīng)激反應(yīng)及扇貝多肽的神經(jīng)保護作用研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

2 于慧美;多功能蛋白p62在人卵巢癌細胞耐藥中的作用及其機制的研究[D];吉林大學(xué);2011年

3 范麗梅;GRP78在卵巢癌中的表達及其對卵巢癌細胞順鉑耐藥的影響[D];吉林大學(xué);2011年

4 吳薇;糖原合成酶激酶3在油酸誘導(dǎo)胰島β細胞凋亡中的作用及調(diào)控[D];華中科技大學(xué);2011年

5 吳薇;糖原合成酶激酶3在油酸誘導(dǎo)胰島β細胞凋亡中的作用及調(diào)控[D];華中科技大學(xué);2011年

6 李旭平;蛋白酶體抑制引起多巴胺神經(jīng)元變性機制和保護策略的研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2007年

7 葉麗平;堿性成纖維細胞生長因子抑制卵巢癌CAOV3細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

8 張瑩;鉛誘導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)星形膠質(zhì)細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

9 姜華;靶向治療藥物對骨髓瘤細胞未折疊蛋白反應(yīng)影響的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 祝群;1-磷酸鞘氨醇及中性神經(jīng)酰胺酶保護炎癥因子引起的胰島β細胞凋亡[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高芳;GLP-1受體激動劑對糖耐量減低大鼠β細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡機制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 惲佳欣;他克莫司對腦星形膠質(zhì)細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及NF-κB活化的調(diào)控作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

3 甘桂香;香煙煙霧經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)肺結(jié)構(gòu)細胞凋亡促進慢性阻塞性肺疾病發(fā)生發(fā)展[D];南華大學(xué);2011年

4 齊偉;調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對大鼠糖尿病腎病的治療及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

5 徐智;不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株GRP78的表達及其對肝癌細胞生物學(xué)行為的影響[D];南昌大學(xué);2011年

6 劉沙沙;噪聲應(yīng)激對大鼠動脈血管平滑肌細胞GRP78和CHOP表達的影響及拉西地平干預(yù)的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

7 劉甜甜;環(huán)氧二十碳三烯酸對內(nèi)皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用及機制[D];華中科技大學(xué);2011年

8 張菲菲;胰高血糖素樣肽-1對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)胰島β細胞凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2011年

9 姜莉;GRP78表達的下調(diào)對肺腺癌細胞耐藥的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

10 林海燕;滋補脾陰方藥對脾陰虛癡呆大鼠不同腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：Rapamycin通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑保護光損傷中視網(wǎng)膜感光細胞，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：259985