【摘要】：目的：糖尿病性視網(wǎng)膜病變(Diabetic retinopathy, DR)是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)特有而常見的嚴(yán)重微血管并發(fā)癥之一,其發(fā)病機(jī)制尚不清楚�，F(xiàn)認(rèn)為氧化應(yīng)激是DR發(fā)生發(fā)展中的共同通路,對(duì)氧化應(yīng)激機(jī)制的深入研究將對(duì)DR的研究具有重要意義。糖尿病時(shí)會(huì)有多種因素導(dǎo)致氧化應(yīng)激,如激活核因子-KB(nuclear factor kappa B, NF-κB),啟動(dòng)下游基因轉(zhuǎn)錄,上調(diào)多種與DR有關(guān)的細(xì)胞因子、炎癥因子、黏附分子的表達(dá)。泛素—蛋白酶體途徑(Ubiquitin-proteasome pathway, UPP)是細(xì)胞內(nèi)主要針對(duì)損傷蛋白質(zhì)發(fā)生特異性降解的重要途徑,近年來的研究顯示NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵分子——抑制因子-KB(inhibitor kappa B, IκB)受到UPP的降解調(diào)節(jié)。但DR時(shí)UPP與NF-κB/IκB信號(hào)通路間的研究尚未見報(bào)道,二者間關(guān)系尚不清楚。本研究通過使用鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)建立早期糖尿病大鼠模型,以泛素蛋白酶體抑制劑MG132作為泛素蛋白酶體途徑特異性抑制劑干預(yù)糖尿病大鼠,抑制UPP對(duì)IκB泛素化降解,觀察泛素蛋白酶體抑制劑對(duì)早期DR中NF-κB以及其抑制性信號(hào)蛋白IκB激酶的降解調(diào)控作用,以及對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells, RGCs)凋亡的影響,從而探討泛素蛋白酶體途徑在糖尿病大鼠早期DR中的作用機(jī)制以及蛋白酶體抑制劑對(duì)DR的干預(yù)作用。方法：1、建立DM大鼠模型及分組：將50只體重約為170克的健康雄性Wistar大鼠常規(guī)喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)選取10只作為正常對(duì)照組(Normal control, NC)、40只為DM模型組。給予DM模型組一次性腹腔注射STZ 60mg/kg建立糖尿病大鼠模型。36只模型組大鼠連續(xù)三天空腹血糖≥16.8mmol/L,確定造模成功并隨機(jī)選取30只分為：DM安慰劑組、DM+MG132低濃度干預(yù)組,DM+MG132高濃度干預(yù)組。自DM模型建立后第三天起,給予DM+MG132低濃度干預(yù)組按0.05mg/kg每天一次腹腔注射MG132 DMSO液,DM+MG132高濃度干預(yù)組按0.1mg/kg每天一次腹腔注射MG132 DMSO液。DM組和NC組每天一次腹腔注射和DM+MG132高濃度干預(yù)組同劑量的0.5%二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)緩沖液。2、觀察各組大鼠一般情況,并于給藥后6周和8周,采用3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠,分別處死各組大鼠5只,心臟采血測(cè)定大鼠空腹血糖。3、分別取出各組大鼠眼球,制作成眼杯,石蠟包埋,行HE染色,觀察視網(wǎng)膜病理變化。4、采用免疫組織化學(xué)法分析NF-κB以及其抑制性信號(hào)蛋白IκB在各組大鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)。5、采用原位末端凋亡檢測(cè)法(transferase-mediated dUTP-biotin nick-end labeling, TUNEL)分析RGCs的凋亡。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)以x士s表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較采用方差分析。P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1、大鼠一般情況指標(biāo)變化：與NC組比較,模型組在注射STZ兩天后開始出現(xiàn)明顯多飲、多尿、體重逐漸下降,到6周和8周時(shí)各指標(biāo)變化更明顯。NF-κB在DM組的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)(P0.01),MG132高濃度干預(yù)組的表達(dá)強(qiáng)度較DM安慰劑組減弱(P0.01)；IκB的表達(dá)則相反(P0.01)；RGCs的凋亡在DR安慰劑組的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增多,MG132高濃度干預(yù)組的表達(dá)強(qiáng)度較DR安慰劑組減少；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。相反,MG132低濃度干預(yù)組,NF-κB和IκB的表達(dá)強(qiáng)度以及RGCs的凋亡與DR安慰劑組相比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1、大鼠一次性腹腔注射60mg/kg STZ成功誘導(dǎo)糖尿病,隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠的血糖及體重等指標(biāo)改變符合糖尿病性變化。2、糖尿病性視網(wǎng)膜病變過程中NF-κB信號(hào)通路激活,且NF-κB的激活與IκBa泛素化降解增加有關(guān),提示UPP參與了糖尿病性視網(wǎng)膜病變NF-κB通路的信號(hào)調(diào)節(jié)。3、蛋白酶體抑制劑MG132可抑制糖尿病性視網(wǎng)膜病變中IκBa的泛素化降解,阻斷NF-κB的轉(zhuǎn)位激活,抑制RGCs的凋亡,改善早期DR病變,表明蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)早期DM大鼠視網(wǎng)膜具有一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：2583295