【摘要】：目的： 喉癌作為耳鼻咽喉-頭頸外科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,近年來(lái)其發(fā)病率有逐年上升趨勢(shì)。喉癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素、多階段和多基因參與的過(guò)程,由多種癌基因的激活、抑癌基因的失活及凋亡基因的失控相互作用引起的。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)膠原三股螺旋重疊蛋白1(CTHRC1)在喉癌組織中的表達(dá)水平,分析CTHRC1的表達(dá)與各臨床病理因素之間的關(guān)系及臨床意義,初步研究其在喉癌發(fā)生發(fā)展中的意義,為喉癌的早期診斷及基因治療提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。 方法： 實(shí)驗(yàn)對(duì)象：材料來(lái)源于天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2008年2月至2013年10月耳鼻咽喉-頭頸外科的住院的喉癌手術(shù)患者,選取喉鱗癌標(biāo)本62例,均經(jīng)病理證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌,臨床分期采用國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)(UICC)2002年公布的TNM分類分期標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ、Ⅱ期42例,Ⅲ期20例,聲門(mén)上型33例,聲門(mén)型29例。年齡42-75歲,中位年齡59歲。對(duì)聲門(mén)型Ⅰ、Ⅱ期喉癌行喉部分切除術(shù),Ⅲ期行次全切除喉或全切術(shù),聲門(mén)上型Ⅰ、Ⅱ期行水平半喉切除,Ⅲ期行喉次全切除或喉全切除術(shù),其中15例獲得相應(yīng)聲門(mén)上型癌旁喉正常粘膜作為對(duì)照(取距癌緣5mm處),經(jīng)病理證實(shí)為炎癥或正常粘膜,其中男性56例,女性6例,高分化38例,中分化14例,低分化10例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有13例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有49例；上述組織為喉鱗癌石蠟標(biāo)本。 為了驗(yàn)證免疫組化的結(jié)果,我們收集20例聲門(mén)上型和聲門(mén)型喉鱗癌組織與癌旁5mm以上的正常上皮組織(經(jīng)病理證實(shí)無(wú)瘤組織浸潤(rùn))的冰凍(-80)標(biāo)本提取mRNA。其中男18例,女2例,高-中分化17例,低分化3例,Ⅰ、Ⅱ期12例,Ⅲ期8例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例,全部患者術(shù)前均未接受放射治療和化學(xué)治療,臨床資料完整,通過(guò)倫理委員會(huì)審查。 1應(yīng)用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC) S-P二步法檢測(cè)62例喉鱗癌組織,15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1基因的蛋白表達(dá)情況,并檢測(cè)CTHRC1是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)存在表達(dá)差異,并統(tǒng)計(jì)分析它們與臨床病理因素的相關(guān)性。 2應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)20例喉鱗癌冰凍(-80℃)組織及20例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的uRNA表達(dá)情況,并統(tǒng)計(jì)分析驗(yàn)證它們與臨床病理因素的相關(guān)性。 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用Pearson's Chi-Square檢驗(yàn)分析CTHRC1mRNA及蛋白的表達(dá)與喉鱗癌患者臨床病理因素的關(guān)系；RT-PCR結(jié)果采用Independent-Samples T檢驗(yàn)分析。以P0.05為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義,以P0.01為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有非常顯著意義。 結(jié)果： 1CTHRC1mRNA及蛋白在喉鱗癌組織和癌旁喉正常粘膜中的表達(dá)及其與臨床病理因素之間的關(guān)系。 1.1免疫組化法：應(yīng)用S-P二步法檢測(cè)(1)62例喉鱗癌組織和15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的蛋白表達(dá)情況,細(xì)胞漿中陽(yáng)性表達(dá)率分別為79.03%(49/62)和13.33%(2/15),前者明顯高于后者,二者統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異具有非常顯著性意義(P0.01),CTHRC1在喉鱗癌組織中的蛋白表達(dá)明顯高于癌旁喉正常粘膜組織。(2)CTHRC1在喉鱗狀細(xì)胞癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)：CTHRC1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的喉癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為92%(23/25),無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的喉癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為70.27%(26/37),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,二者差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有意義(P0.05)。在喉鱗癌中CTHRC1的蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)(P0.05),而與臨床分型、性別及年齡分組無(wú)關(guān)(P0.05)。 1.2RT-PCR法：應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)20例喉鱗癌組織和20例癌旁喉正常粘膜組織中CTHRC1mRNA的表達(dá)情況,喉鱗癌組織的mRNA的平均灰度值為0.93±0.15,而配對(duì)正常喉組織中CTHRC1的mRNA的平均灰度值為0.29±0.23,CTHRC1在喉鱗癌組織中的mRNA表達(dá)明顯高于癌旁喉正常粘膜組織,二者統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異具有非常顯著性意義(P0.01)(圖一、二)；在喉鱗癌中CTHRC1mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P0.05)、臨床分期(P0.01)相關(guān),而與臨床分型、性別及年齡分組無(wú)關(guān)(P0.05)。 結(jié)論： 1在喉鱗癌組織中,CTHRC1呈高表達(dá),提示其可能與喉鱗癌的發(fā)生進(jìn)展相關(guān)。 2在喉鱗癌組織中,CTHRC1呈高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)而與腫瘤病理學(xué)分級(jí)、性別及年齡分組無(wú)關(guān),其可能與腫瘤的侵潤(rùn)及轉(zhuǎn)移相關(guān)。 3CTHRC1可能與喉鱗癌發(fā)生發(fā)展,侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān),有望成為喉鱗癌新的治療靶點(diǎn)及預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2583210