本文關(guān)鍵詞：硫辛酸煙酸二聯(lián)體對丙烯醛介導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮損傷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 探究新型合成藥物硫辛酸煙酸二聯(lián)體對丙烯醛誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（ARPE-19）損傷的保護(hù)作用和丙烯醛介導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜-脈絡(luò)膜組織的損傷作用。 方法： 1、HE染色法檢測ARPE-19細(xì)胞形態(tài)改變；MTT比色法檢測細(xì)胞活性并測其生長曲線。 2、通過MTT比色法、HE染色法檢測丙烯醛介導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞損傷模型的建立：將0μmol/L；25μmol/L；50μmol/L；100μmol/L和200μmol/L丙烯醛分別加入對數(shù)生長期的ARPE-19細(xì)胞中處理24小時，建立視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞損傷模型并確定其最佳損傷濃度。 3、通過細(xì)胞流式和WesternBlot等方法檢測丙烯醛介導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞凋亡及硫辛酸煙酸二聯(lián)體的保護(hù)作用。預(yù)先將0μmol/L；100μmol/L；150μmol/L硫辛酸煙酸二聯(lián)體和100μmol/L硫辛酸分別加入對數(shù)生長期的ARPE-19細(xì)胞中處理24小時，再加入經(jīng)確定的丙烯醛損傷模型濃度處理24小時，細(xì)胞流式方法檢測細(xì)胞凋亡情況，WesternBlot法檢測凋亡蛋白Bax/Bcl-2比率的改變。 4、HE染色法觀察丙烯醛對大鼠視網(wǎng)膜-脈絡(luò)膜組織的損傷作用：隨機(jī)數(shù)字表將12只SD大鼠分為三組，即空白對照組、丙烯醛藥物處理4周組和丙烯醛藥物處理8周組。按2.5mg/kg/day的量將丙烯醛溶于200μl新鮮自來水中，在配藥2h內(nèi)給SD大鼠灌胃，作為丙烯醛藥物處理組；空白組給予等量的新鮮自來水。待動物給藥4周和8周后，分別處死SD大鼠，并取SD大鼠眼球組織，，行常規(guī)HE病理組織切片染色。 5、統(tǒng)計學(xué)分析：實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（μ±s）表示，運用SPSS13.0統(tǒng)計計算軟件進(jìn)行方差分析，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1、ARPE-19細(xì)胞的體外生長情況：ARPE-19細(xì)胞24小時內(nèi)貼壁生長，第1到第6天內(nèi)生長分裂迅速進(jìn)入對數(shù)生長期，6天后細(xì)胞數(shù)開始減少。 2、丙烯醛介導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞損傷模型的建立：當(dāng)丙烯醛濃度達(dá)到50μmol/L時，ARPE-19細(xì)胞活性下降；數(shù)量開始明顯減少，細(xì)胞腫脹，壞死，細(xì)胞核聚集；總凋亡細(xì)胞數(shù)為28.91%明顯高于空白對照組的4.63%，P＜0.05。因此，50μmol/L丙烯醛濃度可作為ARPE-19細(xì)胞損傷模型的最佳濃度。 3、丙烯醛可導(dǎo)致ARPE-19細(xì)胞凋亡，而硫辛酸煙酸二聯(lián)體對此具有拮抗保護(hù)作用：對丙烯醛細(xì)胞損傷模型而言，當(dāng)硫辛酸煙酸二聯(lián)體的預(yù)處理濃度達(dá)到100μmol/L時，正常細(xì)胞率為91.34%；未加入硫辛酸煙酸二聯(lián)體的單純丙烯醛組的正常細(xì)胞率僅為60.98%。硫辛酸煙酸二聯(lián)體可以明顯減少50μmol/L丙烯醛誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞的凋亡，P＜0.05。50μmol/L丙烯醛+100μmol/L硫辛酸煙酸二聯(lián)體組的Bax/Bcl-2蛋白比率為0.5558，50μmol/L丙烯醛組僅為1.3892，P＜0.05。由此可見，硫辛酸煙酸二聯(lián)體對丙烯醛介導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞凋亡具有拮抗保護(hù)作用。 4、丙烯醛對大鼠視網(wǎng)膜-脈絡(luò)膜組織具有損傷作用：空白組及丙烯醛4周組視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜組織結(jié)構(gòu)規(guī)整，RPE-Bruch膜連續(xù)性完整；丙烯醛8周組視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層內(nèi)典型的小丘狀隆起，RPE-Bruch膜連續(xù)性缺失，似新生血管樣組織通過RPE-Bruch膜缺損區(qū)進(jìn)入視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層內(nèi)。 結(jié)論： 1、丙烯醛通過上調(diào)凋亡蛋白Bax的表達(dá)，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，激活線粒體凋亡通路，導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的凋亡。 2、新合成藥物－硫辛酸煙酸二聯(lián)體通過誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，抑制凋亡蛋白Bax的激活，阻斷線粒體凋亡信號通路，從而拮抗丙烯醛對ARPE-19細(xì)胞的損傷作用。 3、丙烯醛可損傷大鼠視網(wǎng)膜-脈絡(luò)膜組織并誘導(dǎo)類脈絡(luò)膜新生血管形成。
【關(guān)鍵詞】：丙烯醛 視網(wǎng)膜色素上皮 硫辛酸煙酸二聯(lián)體 凋亡蛋白Bax 抗凋亡蛋白Bcl-2
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-17
• 第一部分 丙烯醛誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞損傷模型的建立17-32
• 1、引言17
• 2、材料與方法17-25
• 3、結(jié)果25-27
• 4、討論27-32
• 第二部分 硫辛酸煙酸二聯(lián)體對丙烯醛誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用32-40
• 1、引言32
• 2、材料與方法32-36
• 3、結(jié)果36-37
• 4、討論37-40
• 第三部分 丙烯醛介導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜-脈絡(luò)膜組織的損傷作用40-45
• 1、引言40
• 2、材料與方法40-42
• 3、結(jié)果42-43
• 4、討論43-45
• 附圖45-53
• 全文結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 問題和展望60-61
• 英文縮略詞表61-62
• 在校期間發(fā)表論文62
• 在校期間獲得獎勵及參加學(xué)術(shù)會議62-63
• 致謝63

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本文編號：255445