【摘要】：視網(wǎng)膜缺血在青光眼、糖尿病視網(wǎng)膜病變等眾多眼部疾病的發(fā)病機(jī)制中都發(fā)揮重要作用,目前臨床上的治療手段尚不理想。在缺血早期,過(guò)高濃度的谷氨酸是觸發(fā)一系列損傷性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的關(guān)鍵因素之一。而谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)是清除突觸間隙中過(guò)量谷氨酸的關(guān)鍵蛋白之一,對(duì)于防止興奮性氨基酸毒性的產(chǎn)生具有重要作用。 跨角膜電刺激(Transcorneal electrical stimulation, TES)在一些動(dòng)物模型和臨床研究中都初步顯示了良好的神經(jīng)保護(hù)效果,且副作用小,作為一種有潛力的神經(jīng)保護(hù)方法逐步引起了眼科學(xué)者的關(guān)注。但其發(fā)揮具體療效及作用的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。 本研究目的是在由前房灌注構(gòu)建的大鼠視網(wǎng)膜缺血-再灌注模型上探討TES對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)元缺血性損傷的保護(hù)效果,及對(duì)GS表達(dá)產(chǎn)生的影響。通過(guò)存活RGCs數(shù)目計(jì)數(shù),視網(wǎng)膜組織學(xué)分析和ERG等方法從形態(tài)及功能上評(píng)價(jià)TES對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)效果；用免疫組織化學(xué)和Western blot的方法觀察視網(wǎng)膜缺血后在TES干預(yù)下GS的表達(dá)水平,初步探究TES發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的分子機(jī)制。 第一部分 跨角膜電刺激對(duì)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)元缺血性損傷保護(hù)作用的評(píng)估 目的評(píng)價(jià)TES對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)元缺血性損傷形態(tài)和功能的保護(hù)作用 方法選取成年雌性SD大鼠為研究對(duì)象,分為3組,正常組,假刺激組(電流為0μA,1小時(shí)/次),TES組(300μA,1小時(shí)/次)。視網(wǎng)膜缺血模型通過(guò)前房灌注(120mmHg,1小時(shí))構(gòu)建,造模后立刻給予兩天一次的TES,直至14天。造模后7天、14天后通過(guò)視網(wǎng)膜鋪片計(jì)數(shù)熒光金逆標(biāo)的存活神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,用石蠟切片分析視網(wǎng)膜各層厚度,用暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(ERG)評(píng)價(jià)視網(wǎng)膜功能。 結(jié)果視網(wǎng)膜鋪片顯示,正常大鼠視網(wǎng)膜的RGCs平均密度是2365±60(個(gè)/mm2)。缺血后第7天,假刺激組是1477±60 cells/mm2, TES組是1785±59 cells/mm2;第14天假刺激組是1147±56 cells/mm2,TES組是1414±52 cells/mm2。各時(shí)點(diǎn)TES組RGCs的密度與假刺激組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。石蠟切片視網(wǎng)膜厚度分析顯示,正常大鼠內(nèi)界膜到外界膜(ILM-OLM),內(nèi)叢狀層(IPL),外核層(ONL)的平均厚度分別為174.3±3.9μm,43.6±0.6μm,58.1±1.0μm。缺血后第7天,ILM-OLM相對(duì)正常的平均厚度,假刺激組是86.0%,TES組是96.0%；IPL相對(duì)正常的平均厚度,假刺激組是80.9%,TES組是93.1%；ONL相對(duì)正常的平均厚度,假刺激組是84.4%,TES組是97.3%。缺血后第14天,ILM-OLM相對(duì)正常的平均厚度,假刺激組是84%,TES組是92.9%；IPL相對(duì)正常的平均厚度,假刺激組是77.9%,TES組是89.1%；ONL相對(duì)正常的平均厚度,假刺激組是82.4%,TES組是93.6%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,缺血后第7天、14天,TES組ILM-OLM (P＜0.05), IPL (P＜0.01), ONL (P0.01)的平均厚度均顯著高于假刺激組。ERG b波振幅統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,缺血后7天TES組的b波振幅顯著高于假刺激組,并在第14天出現(xiàn)了明顯恢復(fù)(P0.05)。 結(jié)論TES對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)元缺血性損傷后的形態(tài)和功能都有良好的保護(hù)作用。 第二部分 跨角膜電刺激對(duì)大鼠視網(wǎng)膜缺血后谷氨酰胺合成酶表達(dá)的影響 目的研究TES對(duì)大鼠視網(wǎng)膜缺血模型谷氨酰胺合成酶表達(dá)水平的影響,初步探討TES發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。 方法選取成年雌性SD大鼠為研究對(duì)象,分為3組,正常組,假刺激組(電流為0gA,1小時(shí)／次),TES組(300μA,1小時(shí)／次)。視網(wǎng)膜缺血模型通過(guò)前房灌注(120mmHg,1小時(shí))構(gòu)建,造模后立刻給予兩天一次的TES,直至14天。造模后6小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天、14天通過(guò)免疫組織化學(xué)在相同激光共聚焦顯微鏡條件下比較TES組與假刺激組GS的熒光強(qiáng)度和空間分布的差別,進(jìn)一步用Western blot比較兩組GS的表達(dá)水平的不同。 結(jié)果免疫組織化學(xué)和Western blot分析均顯示GS在TES的作用下表達(dá)水平明顯增加,并且至少持續(xù)7天。 結(jié)論TES能增加缺血后視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞上GS的表達(dá)水平,這可能降低谷氨酸濃度,從而減輕谷氨酸介導(dǎo)的興奮性氨基酸毒性,實(shí)現(xiàn)對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)元的保護(hù)作用。
【圖文】：

圖1(A)熒光金逆標(biāo)的視網(wǎng)膜鋪片相對(duì)應(yīng)區(qū)域的代表性圖片。缺血后7d，14d均可見(jiàn)TES組比假刺激組RGCs數(shù)I」多。標(biāo)尺，50扒11:.(B)和假刺激相比，，TES能泛著增加IRGCs數(shù)l習(xí)。Mean士SEM(n一7).t一test.**P<0.01.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R774.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 邵立功,黃湛;視神經(jīng)半截?cái)嗪笊窠?jīng)營(yíng)養(yǎng)因子輔助再生的動(dòng)態(tài)電生理學(xué)研究[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào);2005年03期

2 劉修鐸;呂嘉華;莫曉芬;;視覺(jué)行為學(xué)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)眼耳鼻喉科雜志;2009年01期

3 李學(xué)民,陳曉勇,沈麗,張純,由德勃,陳雪,俞海燕,王薇;大鼠視網(wǎng)膜光損傷前、后視覺(jué)介導(dǎo)的行為變化[J];中華眼科雜志;2005年10期

本文編號(hào)：2551735