【摘要】： 目的 總結(jié)分析目前眼眶淚腺腺樣囊性癌的臨床治療方法和預(yù)后,評(píng)估可能影響預(yù)后的因素。利用納米技術(shù)及局部化療減少全身化療缺乏選擇性、副作用大的問題。制備連接有葉酸(folic acid,FA)的長春新堿(vinscristine, VCR)靶向緩釋納米微球(nanopaticles, NPs),簡稱為FA-PLGA(VCR)-NPs,觀察其理化特征；評(píng)估該藥物對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞株(ACC-2)及裸鼠眼眶移植瘤的抑制作用。進(jìn)一步尋找眼眶腺樣囊性癌治療的新靶標(biāo),即腫瘤干細(xì)胞。觀察腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志蛋白CD44、CD133和ABCG2在淚腺腺樣囊性癌中的表達(dá),研究它們與病理分型、預(yù)后的關(guān)系,為進(jìn)一步開展針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的靶向治療奠定基礎(chǔ)。 方法 1.采用回顧性系列病例研究,分析75例眼眶腺樣囊性癌患者相關(guān)臨床資料,包括患者的手術(shù)記錄、病理分型及隨訪記錄。 2.采用改良的復(fù)乳法制備FA-PLGA(VCR)-NPs;MTT比色法觀察空白微球PLGA-NPs的毒性,比較VCR原藥、載藥微球PLGA(VCR)-NP和FA-PLGA (VCR)-NPs在不同時(shí)間和不同濃度條件下對(duì)ACC-2細(xì)胞的影響；FITC標(biāo)記微球,熒光顯微鏡觀察PLGA-NPs與FA-PLGA-NPs對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用；瘤細(xì)胞懸液接種法建立裸鼠眼眶腺樣囊性癌移植瘤,分別予以瘤內(nèi)注射生理鹽水、VCR、PLGA-NPs、PLGA(VCR)-NPs和FA-PLGA(VCR)-NPs,局部給藥一次,隔天測(cè)量腫瘤體積變化,計(jì)算體積抑制率,高效液相色譜法測(cè)定給藥后不同時(shí)間腫瘤組織內(nèi)殘余VCR濃度,透射電鏡及HE染色觀察腫瘤組織標(biāo)本。 3.采用二步法免疫組織化學(xué)檢測(cè)人眼眶腺樣囊性癌腫瘤組織標(biāo)本33例,復(fù)發(fā)切除標(biāo)本5例及6例荷瘤裸鼠移植瘤標(biāo)本的CD44、CD133和ABCG2的表達(dá)情況,分析其與病理分型及預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)果 1.眼眶實(shí)體型腺樣囊性癌2年復(fù)發(fā)率為85%(17／20)、5年復(fù)發(fā)率為100%(19／19),而腺樣-管狀型分別為23.53%(8／34)和64.52%(20／31),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2年,p=0.000；5年,p=0.003)。前者發(fā)生局部蔓延和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移例數(shù)亦多于后者。腫瘤切除術(shù)后聯(lián)合放射治療的5年復(fù)發(fā)率為70%(14／20),低于單純手術(shù)切除的復(fù)發(fā)率92.86%(13／14)(p=0.198)。首次手術(shù)行眶內(nèi)容物剜除術(shù)的5年復(fù)發(fā)率為25%(1／4),低于復(fù)發(fā)后再行眶內(nèi)容物剜除術(shù)的病例的75%(6／8)(p=0.222),γ刀、粒子刀、化療及生物治療的效果不能確定。局部蔓延主要是至顱內(nèi)、副鼻竇和顳窩,遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移可到達(dá)肺、骨、肝、耳前淋巴結(jié)。5年遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率為25.71%(9／35),肺轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移各占33.33%(3／9)。5年生存率74.29%(26／35),死亡率25.71%(9／35),無瘤生存率37.14%(13／35),10年無瘤生存率17.14%(6／35)。最常見的死亡原因是顱內(nèi)蔓延。腫瘤切除聯(lián)合放射治療可以使5年生存率提高到80%(16／20)。 2.FA-PLGA(VCR)-NPs呈規(guī)則球形,平均粒徑249.2nm,載藥率4.53%,體外釋放時(shí)間達(dá)14天；PLGA-NPs與ACC-2細(xì)胞共培養(yǎng)5天,細(xì)胞存活率達(dá)80%以上；給藥后第4、5天FA-PLGA(VCR)-NPs對(duì)ACC-2細(xì)胞的抑制率顯著高于VCR,呈時(shí)間和濃度依賴性；微球附著于腫瘤細(xì)胞表面,這種識(shí)別可以被FA競爭性抑制；FA-PLGA(VCR)-NPs組及PLGA(VCR)-NPs組對(duì)裸鼠腫瘤的體積抑制率顯著高于VCR組(前者p=0.016,后者p=0.029),FA-PLGA(VCR)-NPs組高于PLGA(VCR)-NPs組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.376)；給藥后第1、7、14天腫瘤組織中殘留藥物濃度存在差異(p=0.000)；透射電鏡觀察14天腫瘤細(xì)胞內(nèi)仍有高電子密度的納米顆粒聚集,腫瘤細(xì)胞壞死明顯,注射周圍組織結(jié)構(gòu)形態(tài)正常。 3.CD44陽性表達(dá)率為54.5%(18／33)。實(shí)體型陽性率76.9%(10／13),多呈片狀散在分布于腫瘤邊緣浸潤灶,而在腫瘤細(xì)胞密集處常常沒有著染；篩網(wǎng)型陽性率為40%(8／20),大多分布在腺管樣結(jié)構(gòu)的外層細(xì)胞,即肌上皮細(xì)胞,二者差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.072)；在非炎癥及惡性腫瘤性疾病切除的正常淚腺組織中CD44亦有陽性表達(dá)。CD133陽性表達(dá)率為57.6%(19／33),在實(shí)體型和篩網(wǎng)型中分別為76.92%(10／13)、45%(9／20),差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.087)；表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,呈淡黃色至棕褐色,部分病例同時(shí)表達(dá)于胞漿和胞核,其中實(shí)體型標(biāo)本有46.15%(6／13),均屬于發(fā)生轉(zhuǎn)移或死亡的病例,篩網(wǎng)型有40%(8／20),其中4例發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,4例四年內(nèi)無復(fù)發(fā)；在非惡性腫瘤性疾病切除的正常淚腺組織中均無表達(dá)。ABCG2陽性表達(dá)率為21.2%(7／33),在實(shí)體型和篩網(wǎng)型中分別為30.77%(4／13)、15%(3／20),差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.393)；ABCG2陽性表達(dá)細(xì)胞具有沿血管分布的傾向。CD44、CD133及ABCG2在預(yù)后較好組(4年無復(fù)發(fā))的陽性表達(dá)率均低于預(yù)后差組,無復(fù)發(fā)組低于發(fā)生轉(zhuǎn)移或死亡組,但差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。Spearman相關(guān)分析提示CD44陽性表達(dá)和CD133的陽性表達(dá)之間存在正相關(guān)關(guān)系,(rs=0.416,p=0.016)。在6例荷瘤裸鼠腫瘤組織標(biāo)本中,CD44陽性1例,CD133表達(dá)陽性1例,ABCG2表達(dá)陽性4例。 結(jié)論 1.腺樣囊性癌是高度惡性的眼眶腫瘤,復(fù)發(fā)率和死亡率均較高,病理分型、治療方法均影響預(yù)后。采取綜合治療方法,可以減少復(fù)發(fā),提高生存率。 2.葉酸靶向長春新堿納米緩釋微球具有穩(wěn)定的載藥率和體外釋放行為,具有良好的靶向識(shí)別力,體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)及荷瘤裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)具有優(yōu)于原藥的抗腫瘤能力。 3.在眼眶腺樣囊性癌腫瘤組織中存在CD44、CD133及ABCG2陽性細(xì)胞,分別表達(dá)于腺樣囊性癌腫瘤組織的不同部位,其表達(dá)隨著病程進(jìn)展而變化,可能會(huì)影響預(yù)后,但并不能作為評(píng)估預(yù)后的因素。
【圖文】：

靶向緩釋微球的結(jié)構(gòu)示意圖

，新堿靶向緩釋微球的制備條件微球的最佳條件:分子量為1萬的PLGA(1om留ml)溶于丙酮混合溶劑中，內(nèi)水相乳化劑PEG濃度為6mg/ml，度為smg/ml，長春新堿濃度為smg/ml。表2.1復(fù)乳法制備微球各相的組成成分所含物質(zhì)WvCR(smg/ml)、PEo(6m留ml)、水PLGA(lomg/ml)、二氯甲烷/丙酮(溶劑配wHEe(sm留ml)、隊(duì)一oQeMe、水新堿靶向緩釋微球的的形態(tài)、粒徑及表面結(jié)構(gòu)分析
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R739.7

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉琳;淚腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：2545349