【摘要】： 目的:翼狀胬肉是眼科較為常見的眼表疾病之一,現(xiàn)研究表明,翼狀胬肉是一種組織增生性結膜疾病,其發(fā)病機理仍不十分清楚,可能與細胞異常增殖和凋亡異常有關。由于翼狀胬肉術后的高復發(fā),有資料表明其與腫瘤有相關性,端粒酶在翼狀胬肉的高表達可能是一個重要原因,所以有必要將端粒酶進行深入的研究。本實驗研究進展期翼狀胬肉組織端粒酶的活性和端粒酶逆轉錄酶(human telemerase reverse transcriptase, hTERT)mRNA的表達。增殖細胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen, PCNA)作為DNA聚合酶的輔助蛋白直接參與了細胞的增殖活性,在靜止期的細胞內含量很少,從G1晚期開始增加,S期達高峰,G2期、M期明顯下降,故被認為是一種準確簡便且可了解細胞增殖狀況的重要研究指標。翼狀胬肉為增生性病變,本研究擬對病例組與正常組PCNA的免疫組化比較。VEGF是一種功能強大且能產生多種生物學效應的細胞因子,它是1989年Ferrarra在牛垂體濾泡星狀細胞培養(yǎng)液中分離純化出來的一類糖蛋白,是血小板衍生生長因子(platelet derived growth factor, PDGF)家族的一個成員,分子量為34 - 45 KD,序列高度保守,廣泛分布于人和動物體內的大腦、腎臟、肝臟、脾臟、胰腺和骨骼等組織中,它是最直接的血管內皮細胞促分裂素,并且作為血管生成旁分泌刺激因子而被分泌。VEGF是目前研究發(fā)現(xiàn)的功能最強的血管形成促進因子,它可以增強微血管的通透性,刺激內皮細胞分裂,增加組織因子和某些蛋白酶的產生。VEGF主要與VEGF受體相互作用,通過內皮細胞的細胞內信號轉導途徑引起血管通透性增加,促進血管內皮細胞增殖、遷移,從而誘導血管新生。有研究表明血管的生長和成熟是高度復雜和協(xié)調的過程,需要用多種配體序貫活化一系列受體而完成。在正常生理性血管生長過程中,如胚胎形成、骨骼生長等,VEGF信號代表重要的限制酶,在病理情況下,可出現(xiàn)VEGF的異常表達,在缺血性疾病中,缺氧可刺激VEGF表達上調,通過對內皮細胞強烈的促有絲分裂作用,促進新生血管形成;VEGF可以增加血管的通透性,尤其是微小血管的通透性,引起血漿蛋白滲漏到細胞外基質,在細胞外基質中沉著,為成纖維細胞和血管內皮細胞的遷入提供條件基質,為腫瘤細胞的生長和新生毛細血管網的建立提供營養(yǎng)。以往翼狀胬肉被認為是一種結膜組織的變性,近期的研究結果認為,翼狀胬肉可能是一種生長過程的紊亂。亦有研究表明,轉基因鼠在皮膚上過度表達VEGF,明顯影響皮膚的血管新生,使皮膚出現(xiàn)類似牛皮癬樣的炎性反應。所以更有必要從以上的不同角度綜合進行研究。本文從以下幾個方面進行探討: 1.通過對端粒酶的研究,深入了解翼狀胬肉的發(fā)病機制,為預防治療翼狀胬肉提供新思路。 2.通過對VEGF表達的研究,了解翼狀胬肉的發(fā)生機制,提供降低其復發(fā)率的治療理論依據。 3.探討端粒酶表達與VEGF表達的關系。 方法:從本院2009.1—2009.9門診初發(fā)的進行期翼狀胬肉手術患中選擇標本二十二例,入選標準:男性11例,女性11例,年齡35-75歲,病程8月至20年,所有病例均無其他結膜、角膜疾病,排除鞏膜炎,色素膜炎等有關的疾病,排除腫瘤及免疫系統(tǒng)等引起眼部增生的全身疾病,術后經病理檢查確診是翼狀胬肉的。另取年齡和條件相匹配的正常球結膜(2mm×2mm)8例作為對照,其中男性5例,女性3例,年齡32-65歲。標本經10%甲醛固定,常規(guī)脫水、石蠟包埋,作3μm連續(xù)切片,分別進行VEGF、PCNA、TERT免疫組織化學染色,并且對hTERT進行原位雜交染色。 結果判斷:胞漿內有呈棕黃色顆粒反應產物的為陽性細胞。光鏡下每例標本切片任取5個視野進行細胞計數,至少計數500個細胞,以陽性細胞占細胞總數的百分比表示陽性表達率。A為陽性細胞數分級:0～1%=0,1～10%=1,10～50%=2,50～80%=3,80～100%=4。 B為陽性細胞顯色強度分級:0(陰性),1(弱陽性),2(陽性),3(強陽性)。IHS=A×B 統(tǒng)計方法:研究病例組與正常組間均采用染色強度及染色陽性率乘積的IHS評分,成組設計兩樣本比較的秩和檢驗,病例組hTERT和VEGF兩樣本比較的秩和檢驗。所有分析采用spss16.0統(tǒng)計軟件包,取a=0.05做為檢驗標準。 結果: 1病例組與正常組的VEGF:VEGF蛋白主要定位在血管內皮和細胞漿表達細胞漿,胞核無著色,陽性部位主要在上皮中的杯狀細胞(Fig.1)。兩組IHS數值比較Z值為-3.324,p值為0.001(0.05)差異有統(tǒng)計學意義(Table1)。 2病例組與正常組的PCNA:PCNA抗體主要在細胞核表達(Fig.2)。兩組IHS數值比較Z值為-3.371,p值為0.001(0.05)差異有統(tǒng)計學意義(Table2)。 3病例組與正常組的hTERT:hTERT抗體主要在細胞漿表達(Fig.3)。兩組IHS數值比較Z值為-4.256,p值為0.000(0.05)與對照組的差異有統(tǒng)計學意義(Table3)。 4病例組與正常組的hTERT mRNA:hTERT mRNA主要定位細胞漿,胞核無著色(Fig.4)。兩組IHS表比較Z值為-3.415,p值為0.001(0.05)差異有統(tǒng)計學意義(Table4)。 5病例組hTERT與VEGF的比較:兩組IHS數值比較Z值為-2.072,p值為0.038(0.05)兩組的差異有統(tǒng)計學意義(Table5)。 結論:病例組VEGF,PCNA,hTERT,hTERT mRNA染色級別均明顯高于正常組,可以認為進展期翼狀胬肉中以上指標與正常組比較有明顯表達。進一步證實了其與細胞異常增殖和凋亡異常有關。進展期翼狀胬肉中端粒酶與VEGF有一致性表達,端粒酶表達強度高于VEGF的表達。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R777.3

【參考文獻】

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本文編號：2540172