【摘要】： 目的： 用非侵襲性的方法確定正常小鼠的眼內(nèi)壓值；建立小鼠的慢性高眼壓模型；觀察c-Jun氨基末端激酶3 (c-Jun N-terminal kinases3, JNK3)在正常小鼠和慢性高眼壓模型小鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)情況；分析JNK3和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 方法： 1、用TONO-PEN AVIA眼壓筆測(cè)量正常C57BL/6小鼠眼內(nèi)壓,連續(xù)五天。 2、44只C57BL/6小鼠一側(cè)眼用來(lái)誘導(dǎo)慢性高眼壓。散大瞳孔后麻醉小鼠,前房穿刺使前房變淺,使用532激光行角膜緣激光光凝(能量100 mW、時(shí)間0.05秒、光斑大小200um)。另一只眼作為對(duì)照眼。TONO-PEN AVIA眼壓筆分別在激光光凝后1周、2周、4周、8周測(cè)量小鼠眼內(nèi)壓。裂隙燈顯微鏡觀察小鼠眼球結(jié)構(gòu)變化情況。 3、分別于1周、2周、4周和8周摘除小鼠雙側(cè)眼球,進(jìn)行冰凍切片,采用HE染色,光鏡下觀察視網(wǎng)膜情況。TUNEL計(jì)數(shù)視網(wǎng)膜切片的細(xì)胞凋亡。RT-PCR檢測(cè)正常小鼠和慢性高眼壓模型小鼠視網(wǎng)膜中JNK3 mRNA的表達(dá)量。 結(jié)果： 1、正常小鼠眼內(nèi)壓是13.46±2.05mmHg。最高19mmHg,最低9mmHg。 2、在1到8周,實(shí)驗(yàn)眼的眼內(nèi)壓明顯高于對(duì)照眼(p0.05),最高眼內(nèi)壓是31mmHg,只有一眼。眼壓平均在20mmHg左右。激光光凝后所有實(shí)驗(yàn)眼出現(xiàn)角膜水腫,但在3天后角膜完全透明,2只眼發(fā)生角膜混濁,2只眼發(fā)生白內(nèi)障,1只眼發(fā)生眼球萎縮,1只眼發(fā)生眼球穿孔。4只眼壓無(wú)明顯升高。而在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中,對(duì)照眼沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何并發(fā)癥。 3、在實(shí)驗(yàn)眼HE染色可見(jiàn)房角狹窄。在第2周,內(nèi)核層和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù)較對(duì)照眼輕度減少,在第4周和第8周,細(xì)胞數(shù)明顯減少。第1周、第2周、第4周和第8周,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別是0.38±0.49、0.52±0.64、0.46±0.66和0.50±0.59。而在對(duì)照眼,未發(fā)現(xiàn)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞(p0.05),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR結(jié)果顯示JNK3 mRNA表達(dá)量隨眼壓升高而升高,但各個(gè)時(shí)期實(shí)驗(yàn)眼JNK3 mRNA的表達(dá)量未見(jiàn)明顯差異。 結(jié)論： 1、TONO-PEN AVIA眼壓筆能較快的測(cè)量小鼠眼內(nèi)壓并且重復(fù)性高。它也能用于小鼠高眼壓模型的眼內(nèi)壓測(cè)量。 2、角膜緣激光光凝能造成小鼠眼內(nèi)壓升高,通過(guò)這個(gè)方法可以建立研究青光眼視神經(jīng)損害的模型。 3、視網(wǎng)膜中JNK3 mRNA表達(dá)量的增高與眼內(nèi)壓的升高密切相關(guān)。它可能在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的機(jī)制中發(fā)揮一定作用。
【圖文】：

同時(shí)右眼倍諾喜滴眼液點(diǎn)眼3次。仔細(xì)觀察每只小鼠的如果捏小鼠的后背皮膚無(wú)反應(yīng)則進(jìn)行手術(shù)。(3)前房穿刺:在裂隙燈顯微鏡下，用0.3xl3大小的針頭從鼻下方刺入前房，，釋放房水，使前房變淺，房角關(guān)閉。(圖2)(4)激光光凝:前房變淺后立即用532一二極管激光直接行右眼角膜。激光的能量大小、時(shí)間和光斑大小分別為:100mw、0.055和Zoo士8個(gè)。整個(gè)過(guò)程在10分鐘內(nèi)完成。(圖3)(5)術(shù)后處理:術(shù)后點(diǎn)潤(rùn)舒滴眼液和紅霉素眼膏。并觀察小鼠全身情。

(4)激光光凝:前房變淺后立即用532一二極管激光直接行右眼角膜緣3600光凝。激光的能量大小、時(shí)間和光斑大小分別為:100mw、0.055和Zooum。光斑93士8個(gè)。整個(gè)過(guò)程在10分鐘內(nèi)完成。(圖3)(5)術(shù)后處理:術(shù)后點(diǎn)潤(rùn)舒滴眼液和紅霉素眼膏。并觀察小鼠全身情況至其蘇醒。Schie住irn、管圖1散大瞳孔前房穿刺圖2前房穿刺
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R77

【引證文獻(xiàn)】

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1 程輝;宋育澤;;JNK信號(hào)通路與缺血再灌注損傷的相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2011年28期

本文編號(hào)：2537055